發(fā)布時(shí)間：2017-08-26 05:28

  本文關(guān)鍵詞：柯薩奇病毒A組16型抗原定量檢測ELISA方法的建立及初步應(yīng)用

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【摘要】：目的建立柯薩奇病毒A組16型(Coxsackievirus group A type 16,CA16)抗原定量檢測的ELISA方法,用于CA16疫苗中抗原的定量檢測。方法以純化的CA16病毒顆粒作為免疫原,分別免疫家兔和BALB/c小鼠,制備抗CA16多克隆抗體和單克隆抗體。以抗CA16多抗作為包被抗體,經(jīng)HRP酶標(biāo)記的單抗作為酶標(biāo)抗體,建立CA16抗原定量檢測的雙抗體夾心ELISA方法,確定該方法的線性范圍,并進(jìn)行準(zhǔn)確度、精密度、穩(wěn)定性及特異性驗(yàn)證。用建立的方法檢測CA16疫苗原液制備過程樣品中CA16抗原含量。結(jié)果以抗CA16多抗為包被抗體,針對74株不同基因型的CA16的ELISA檢測結(jié)果均為陽性,該抗CA16單抗的廣譜性較好。該方法的線性范圍為23.4~750 ng/ml,R20.99,最小檢出量為23.4 ng/ml;樣品回收率在89%~108%之間,CV15%,準(zhǔn)確度和精密度較好;抗體包被板干燥后于37℃放置6 d,CV20%,穩(wěn)定性較好;PV純化樣品、EV71收獲液、Vero細(xì)胞樣品中抗原的A值均小于cutoff值,特異性較好。隨著CA16疫苗制備過程的不斷進(jìn)行,中間品1~4比活分別為0.44、0.64、92.13和1 239.03,呈逐漸上升趨勢。結(jié)論建立了CA16抗原定量檢測的雙抗體夾心ELISA方法,該方法準(zhǔn)確度、精密度高,穩(wěn)定性及特異性較好,為CA16疫苗的研制及工藝開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 北京生物制品研究所有限責(zé)任公司;北京微谷生物醫(yī)藥有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 柯薩奇病毒A組型 抗原 酶聯(lián)免疫吸附法
【基金】：十二五“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(xiàng)(2013ZX09402302) 北京市科委基金資助(Z131100006513007) 國藥新產(chǎn)品基金(2013SW03)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 近年來兒童手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)在我國持續(xù)流行,衛(wèi)計(jì)委已于2008年5月將其列入法定丙類傳染病。全國法定傳染病報(bào)告顯示,2012年,HFMD發(fā)病數(shù)為2 168 737例,死亡567例,與2011年相比,發(fā)病率和死亡率分別增長33.26%和10.79%,位居丙類傳染病報(bào)告發(fā)病數(shù)首位[1]。

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本文編號(hào)：739949