本文關(guān)鍵詞：抗人甲胎蛋白單克隆抗體的制備及雙抗體夾心ELISA檢測(cè)技術(shù)的建立

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【摘要】：目的制備、篩選多株具有商用價(jià)值的可配對(duì)的高特異性、高親和力的抗人甲胎蛋白(hAFP)單克隆抗體,初步建立雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法。方法通過經(jīng)典的淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)篩選分泌抗hAFP單抗的雜交瘤細(xì)胞株;對(duì)篩選所得單抗的特性進(jìn)行鑒定分析;雙抗體夾心ELISA法篩選最佳配對(duì)抗體;初步建立DAS-ELISA檢測(cè)方法并檢測(cè)血樣,繪制其標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)曲線并與進(jìn)口試劑盒比較。結(jié)果共獲得12株穩(wěn)定分泌抗hAFP單抗的雜交瘤細(xì)胞株,其中Ab 1~Ab 5 5株單抗的腹水效價(jià)均高于600萬,Ab 5的效價(jià)高達(dá)3000萬;特異性鑒定結(jié)果表明Ab 1~Ab 5均能夠特異識(shí)別天然hAFP分子,但Ab 5與人血清白蛋白(HSA)存在較強(qiáng)交叉反應(yīng);抗體配對(duì)實(shí)驗(yàn)共篩選出5對(duì)(Ab 1/HRP-Ab 2、Ab 1/HRP-Ab 4、Ab 3/HRP-Ab 2、Ab 3/HRP-Ab 4和Ab 4/HRP-Ab 1)能夠滿足hAFP檢測(cè)要求且無交叉反應(yīng)的配對(duì)抗體,最終確定Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 2和Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 4為最佳配對(duì)組合;利用最佳配對(duì)抗體組合建立標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)曲線,其線性檢測(cè)范圍為5~250 ng/ml,最低檢測(cè)限2 ng/ml,檢測(cè)上限400 ng/ml,優(yōu)于進(jìn)口試劑盒的線性范圍5~200 ng/ml和最低檢測(cè)限5 ng/ml;樣檢結(jié)果顯示自制試劑盒的陽性血清檢測(cè)準(zhǔn)確率99.2%(119/120例),陰性血清準(zhǔn)確率100%(40/40例)。結(jié)論篩選獲得的4株高親和力、高特異性抗hAFP單抗均可應(yīng)用于DAS-ELISA試劑盒的研制,Ab 1和Ab 3適合作為捕獲抗體,Ab 2和Ab 4適合作檢測(cè)抗體;自制試劑盒的線性檢測(cè)范圍和最低檢測(cè)限均優(yōu)于進(jìn)口試劑盒,表明具有商用價(jià)值。
【作者單位】： 廣東省分子免疫與抗體工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/暨南大學(xué)抗體工程研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 甲胎蛋白類 抗體 單克隆 雙抗體夾心ELISA
【基金】：廣東省戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)核心技術(shù)攻關(guān)項(xiàng)目“免疫熒光定量快速檢測(cè)技術(shù)在重大疾病檢測(cè)中的應(yīng)用”(2012A080800007)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 人甲胎蛋白(human alpha fetoprotein,hAFP)是一種由胎兒肝細(xì)胞和卵黃囊合成出的胚胎性糖蛋白,其功能與人血清白蛋白(human serumalbumin,HSA)相似,可視其為胎兒發(fā)育時(shí)期的 HSA替代物[1-2]。正常情況下,hAFP僅存在于胎兒血清中,胎兒出生一年后hAFP濃度降回正常人水平(5 ng/m

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本文編號(hào)：721402