本文關鍵詞：抗人甲胎蛋白單克隆抗體的制備及雙抗體夾心ELISA檢測技術的建立

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【摘要】：目的制備、篩選多株具有商用價值的可配對的高特異性、高親和力的抗人甲胎蛋白(hAFP)單克隆抗體,初步建立雙抗體夾心ELISA檢測方法。方法通過經(jīng)典的淋巴細胞雜交瘤技術篩選分泌抗hAFP單抗的雜交瘤細胞株;對篩選所得單抗的特性進行鑒定分析;雙抗體夾心ELISA法篩選最佳配對抗體;初步建立DAS-ELISA檢測方法并檢測血樣,繪制其標準檢測曲線并與進口試劑盒比較。結(jié)果共獲得12株穩(wěn)定分泌抗hAFP單抗的雜交瘤細胞株,其中Ab 1~Ab 5 5株單抗的腹水效價均高于600萬,Ab 5的效價高達3000萬;特異性鑒定結(jié)果表明Ab 1~Ab 5均能夠特異識別天然hAFP分子,但Ab 5與人血清白蛋白(HSA)存在較強交叉反應;抗體配對實驗共篩選出5對(Ab 1/HRP-Ab 2、Ab 1/HRP-Ab 4、Ab 3/HRP-Ab 2、Ab 3/HRP-Ab 4和Ab 4/HRP-Ab 1)能夠滿足hAFP檢測要求且無交叉反應的配對抗體,最終確定Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 2和Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 4為最佳配對組合;利用最佳配對抗體組合建立標準檢測曲線,其線性檢測范圍為5~250 ng/ml,最低檢測限2 ng/ml,檢測上限400 ng/ml,優(yōu)于進口試劑盒的線性范圍5~200 ng/ml和最低檢測限5 ng/ml;樣檢結(jié)果顯示自制試劑盒的陽性血清檢測準確率99.2%(119/120例),陰性血清準確率100%(40/40例)。結(jié)論篩選獲得的4株高親和力、高特異性抗hAFP單抗均可應用于DAS-ELISA試劑盒的研制,Ab 1和Ab 3適合作為捕獲抗體,Ab 2和Ab 4適合作檢測抗體;自制試劑盒的線性檢測范圍和最低檢測限均優(yōu)于進口試劑盒,表明具有商用價值。
【作者單位】： 廣東省分子免疫與抗體工程重點實驗室/暨南大學抗體工程研究中心;
【關鍵詞】： 甲胎蛋白類 抗體 單克隆 雙抗體夾心ELISA
【基金】：廣東省戰(zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)核心技術攻關項目“免疫熒光定量快速檢測技術在重大疾病檢測中的應用”(2012A080800007)
【分類號】：R392
【正文快照】： 人甲胎蛋白(human alpha fetoprotein,hAFP)是一種由胎兒肝細胞和卵黃囊合成出的胚胎性糖蛋白,其功能與人血清白蛋白(human serumalbumin,HSA)相似,可視其為胎兒發(fā)育時期的 HSA替代物[1-2]。正常情況下,hAFP僅存在于胎兒血清中,胎兒出生一年后hAFP濃度降回正常人水平(5 ng/m

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 譚靖,陳桂滋,于民,賈振庚,潘瑞芹;用單克隆抗體EA—4檢測胃癌患者血清中相關抗原[J];中國免疫學雜志;1989年04期

2 王芳，薛沿寧，王會信，，劉農(nóng)樂，周廷沖;人酸性成纖維細胞生長因子雙抗體夾心測定方法[J];軍事醫(yī)學科學院院刊;1994年04期

3 童鐵鋼;白宇;張維軍;王群;劉光亮;徐樹蘭;吳東來;;檢測馬白細胞介素-18雙抗體夾心ELISA方法的建立[J];細胞與分子免疫學雜志;2009年04期

4 吳克;鼠免疫球蛋白存在時用免疫分析法測定葡萄球菌A蛋白[J];國際生物制品學雜志;1992年03期

5 徐曉鵬;向軍儉;李貴生;鄧寧;唐勇;王宏;楊紅宇;;雙抗體夾心ELISA檢測堿性成纖維細胞生長因子[J];細胞與分子免疫學雜志;2006年02期

6 劉偉;鄭淑華;呂晶;鮑晶晶;王紅梅;關向前;張慧;徐軍發(fā);;檢測人可溶性皰疹病毒侵入介體雙抗體夾心ELISA的建立[J];細胞與分子免疫學雜志;2011年09期

7 姜碧;;分泌型mB7-H4-hIg重組融合蛋白定量檢測方法的建立和應用[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;2011年04期

8 何濤君;陳洲;邱竹英;王瓊;陸學東;;腦鈉肽單克隆抗體的制備及臨床應用研究[J];細胞與分子免疫學雜志;2010年01期

9 王廣蘭;劉亞利;初霞;張長遠;宮璀璀;王文麗;高天藍星;;兔抗人sCR1抗體制備及臨床初步應用[J];臨床檢驗雜志;2010年02期

10 郭永利;陳毅歆;黃德黨;羅海峰;葛勝祥;程通;張軍;夏寧邵;;適于HIV-1 p24抗原檢測試劑的單抗制備與篩選[J];中國人獸共患病學報;2007年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王成祖;張瑾;劉池波;劉文琪;;抗日本血吸蟲SEA雞卵黃抗體的制備與鑒定及其初步應用[A];2009年浙江省檢驗醫(yī)學學術年會論文匯編[C];2009年

2 王勤;陳永井;瞿秋霞;張學光;;人可溶性OX40L酶聯(lián)試劑盒的研制及其運用[A];中國細胞生物學學會2005年學術大會、青年學術研討會論文摘要集[C];2005年

3 徐竹蔚;宋朝君;劉雪松;李琦;王鑫;莊然;金伯泉;;定量檢測多種融合標簽的夾心ELISA方法的建立及其初步應用[A];中國免疫學會第五屆全國代表大會暨學術會議論文摘要[C];2006年

4 汪霞;徐葛林;吳杰;羅靜;;細胞培養(yǎng)法檢測和分離狂犬病街毒的可行性研究[A];第六屆全國免疫學學術大會論文集[C];2008年

5 楊世炳;唐久來;盛曉蓉;;人巨細胞病毒pp65DNA疫苗誘導小鼠免疫效應的研究[A];第六屆江浙滬兒科學術會議暨兒科學基礎與臨床研究進展學術班論文匯編[C];2009年

6 黃永國;張春燕;龔勁松;陳妍;張波;李方和;;小鼠IgG定量ELISA檢測實驗參比品的制備及其初步應用[A];中國免疫學會第五屆全國代表大會暨學術會議論文摘要[C];2006年

7 肖海燕;朱平;蔣小滔;富寧;;人HbA_2單抗制備及ELISA檢測體系的建立[A];第六屆全國免疫學學術大會論文集[C];2008年

8 王成祖;張瑾;劉池波;劉文琪;;抗日本血吸蟲SEA雞卵黃抗體的制備與鑒定及其初步應用[A];第二屆中國醫(yī)學細胞生物學學術大會暨細胞生物學教學改革會議論文集[C];2008年

9 楊云霞;郝杰;王沼丹;;Aβ_(1-42)誘導U251細胞趨化因子RANTES表達的研究[A];全國第十一屆生化與分子藥理學學術會議論文集[C];2009年

10 陳德宇;朱國華;黃宇烽;;精漿內(nèi)前列腺素D合成酶與α-葡糖苷酶的相關性研究[A];21世紀男科學——中華醫(yī)學會第五次全國男科學學術會議論文集[C];2004年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 吳春風;抗人誘騙受體3多克隆抗體、單克隆抗體的制備及初步應用[D];吉林大學;2008年

2 徐竹蔚;CD226分子與腫瘤和實驗性自身免疫性腦脊髓炎關系的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2009年

3 白宇;馬γ-干擾素單克隆抗體的制備及細胞免疫評價方法的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學院;2008年

4 周蓮娣;香菇多糖對約氏瘧原蟲感染BALB/c小鼠紅內(nèi)期免疫應答調(diào)節(jié)的實驗研究[D];中國醫(yī)科大學;2008年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 竇蕊;雙抗體夾心ELISA法檢測腺癌患者外周血MUC1蛋白水平[D];吉林大學;2010年

2 高榮;β-hCG化學發(fā)光酶免疫分析方法的建立[D];吉林大學;2007年

3 王成祖;抗日本血吸蟲SEA雞卵黃抗體的制備與鑒定[D];華中科技大學;2007年

4 李玉華;（一）實驗動物支原體感染雙抗體夾心ELISA方法的建立 （二）人工培養(yǎng)環(huán)境對肺支原體致病性和抗原性的影響[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2007年

5 陳錫福;抗膽汁螺桿菌單克隆抗體的研制及其初步應用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學;2008年

6 陳俊華;抗雞IL-4單克隆抗體的研制及其雙抗體夾心ELISA方法的初步建立[D];揚州大學;2009年

7 周春峰;甲型H1N1（2009）流感病毒HA的原核表達、抗體制備及初步應用[D];河南工業(yè)大學;2011年

8 廖志勇;禽流感病毒（H5N1）血凝素特異性單克隆抗體的制備、鑒定及其ELISA捕獲法的建立[D];第一軍醫(yī)大學;2007年

9 蔣琴;人血清白蛋白抗體的制備及多種免疫學方法的初步建立[D];長春理工大學;2010年

10 晉晶;Ⅲ型登革病毒NS1蛋白特異性單克隆抗體的制備、鑒定及方法學建立[D];南方醫(yī)科大學;2008年

本文編號：721402