本文關(guān)鍵詞：超濾技術(shù)去除重組MUC1-MBP融合蛋白中內(nèi)毒素的效果評價(jià)

  更多相關(guān)文章： MUC-MBP融合蛋白 離子交換層析 疏水層析 超濾技術(shù) 內(nèi)毒素 顯色基質(zhì)法鱟試劑

【摘要】：目的:評價(jià)超濾技術(shù)去除純化后重組MUC1-MBP融合蛋白(MUC1-MBP)溶液中內(nèi)毒素的效果,闡明超濾技術(shù)對去除內(nèi)毒素的作用。方法:選取表達(dá)MUC1-MBP大腸桿菌基因工程菌,分別通過CM Sepharose FF離子交換層析(CM)(CM組)、CM聯(lián)合Phenyl Sepharose 6FF疏水層析(C6)(CM+C6組)、CM加超濾(CM+超濾組)以及CM聯(lián)合C6加超濾(CM+C6組+超濾)進(jìn)行純化,并去除內(nèi)毒素;采用SDS-PAGE分析蛋白純度;鱟試劑顯色基質(zhì)法檢測內(nèi)毒素表達(dá)水平。結(jié)果:SDS-PAGE分析,在預(yù)期相對分子質(zhì)量62 000處呈現(xiàn)單一條帶,Quantity One分析純度96%;CM組與CM+C6組內(nèi)毒素表達(dá)水平均較高,但2組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與CM組比較,CM+超濾組內(nèi)毒素表達(dá)水平明顯降低(P0.01);與CM+C6組比較,CM+C6超濾組內(nèi)毒素表達(dá)水平明顯降低(P0.01);CM+超濾組與CM+C6+超濾組內(nèi)毒素表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:CM或CM聯(lián)合C6均不能有效去除內(nèi)毒素,其中C6對去除內(nèi)毒素幾乎無作用;CM加超濾可有效去除內(nèi)毒素,超濾技術(shù)在去除內(nèi)毒素中發(fā)揮重要作用。
【作者單位】： 吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： MUC-MBP融合蛋白 離子交換層析 疏水層析 超濾技術(shù) 內(nèi)毒素 顯色基質(zhì)法鱟試劑
【基金】：科技部“十二五”重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)資助課題(2011ZX09102001-36)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： MUC1-MBP是本實(shí)驗(yàn)室將編碼人類MUC1基因按正確閱讀框插入高效表達(dá)麥芽糖結(jié)合蛋白(maltose binding protein,MBP)的載體pMAL-p2中,構(gòu)建了表達(dá)MUC1-MBP的重組質(zhì)粒,然后在大腸桿菌中通過擴(kuò)增培養(yǎng)、IPTG誘導(dǎo)表達(dá)及一系列純化工藝得到的重組MUC1-MBP融合蛋白[1]。內(nèi)毒素的化學(xué)本質(zhì)

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 徐向榮;馬國昌;王昌梅;單劍峰;沈玲;黃巖山;周金寶;;層析法去除重組人血清白蛋白干擾素α2b融合蛋白的內(nèi)毒素[J];生物工程學(xué)報(bào);2008年01期

2 張朵;李博;蘭風(fēng)華;;以TritonX-114液相分離法去除質(zhì)粒溶液中的內(nèi)毒素[J];生物技術(shù)通訊;2007年06期

3 張惠新,戴海平,孫方,王龍興;中空纖維超濾膜去除細(xì)菌內(nèi)毒素效果評價(jià)[J];天津工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年02期

4 王錚,張惠新,戴海平;超濾法去除細(xì)菌內(nèi)毒素[J];衛(wèi)生研究;2001年05期

5 秦峰,劉學(xué)良,魏桂林,王俊德;生物醫(yī)藥制劑中內(nèi)毒素去除研究進(jìn)展[J];藥物生物技術(shù);2003年01期

6 臺桂香,張吉鳳,朱迅;重組人MUC1-MBP融合蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)、純化及其免疫活性測定[J];中國免疫學(xué)雜志;2003年11期

7 程春雷;高天勤;;生物制品內(nèi)毒素的祛除方法研究進(jìn)展[J];中國新藥雜志;2009年05期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姚向峰;韓飛;;膜分離技術(shù)在超純透析液制備中的應(yīng)用[J];水處理技術(shù);2009年09期

2 陳丹丹;;過濾和離心對熱原實(shí)驗(yàn)影響的初步研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2011年05期

3 邢海新;黃永東;李巖;羅堅(jiān);張麗葉;馬光輝;蘇志國;;親和介質(zhì)及溶液條件對蛋白質(zhì)溶液中內(nèi)毒素去除的影響[J];生物工程學(xué)報(bào);2010年11期

4 李淵;竇國勝;;巰基吡啶配基液相色譜固定相的制備及其對質(zhì)粒的快速純化[J];色譜;2007年06期

5 高航;臺桂香;馬吉春;柳忠輝;;小鼠MUC1基因的克隆及其在大腸桿菌DH5α中的表達(dá)[J];中國生物制品學(xué)雜志;2007年02期

6 殷玉和;孫博;郭麗姝;所丹;孔維;;中空纖維超濾和疏水層析大規(guī)模純化質(zhì)粒DNA[J];中國生物制品學(xué)雜志;2007年02期

7 王雪薇;王建華;;Triton X-114萃取法去除腦膜炎球菌莢膜多糖中的內(nèi)毒素[J];中國生物制品學(xué)雜志;2008年05期

8 尹楠;鄭云楓;彭國平;;基于超濾技術(shù)的血塞通注射液的工藝優(yōu)化[J];天然產(chǎn)物研究與開發(fā);2009年01期

9 李芝芹;邱爽;雷楗勇;陳蘊(yùn);金堅(jiān);;重組人血清白蛋白-干擾素β融合蛋白的分離純化及質(zhì)控方法的建立[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年10期

10 劉英微;王曦;張德有;楊旭琴;許寧;張昀;蘇錦鋒;何亞麗;王樹毅;李津;;重組漢遜酵母表達(dá)的HBsAg純化工藝中內(nèi)毒素的去除效果[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年11期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉英微;王曦;柳薔;何亞麗;張德有;馬銳;李津;;重組漢遜酵母表達(dá)HBsAg純化過程去除內(nèi)毒素研究[A];2011中國生物制品年會暨第十一次全國生物制品學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 劉金龍;微生物發(fā)酵法制備聚唾液酸的研究[D];江南大學(xué);2011年

2 宋英今;HIV-1治療性重組DNA疫苗的構(gòu)建、純化及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2005年

3 唐守萬;芳香氨基酸及內(nèi)毒素吸附劑的制備與應(yīng)用[D];中國科學(xué)院研究生院（大連化學(xué)物理研究所）;2007年

4 張媛媛;用于內(nèi)毒素去除的新型親和吸附劑的制備及性能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2007年

5 劉鵬;液固界面上蛋白質(zhì)遷移規(guī)律研究[D];西北大學(xué);2009年

6 申鎮(zhèn)維;新型HIV多表位重組疫苗的構(gòu)建、純化及其實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2009年

7 趙小霞;大腸桿菌麥芽糖結(jié)合蛋白非特異性活化T細(xì)胞及其對血液腫瘤細(xì)胞作用機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林怡;聚唾液酸修飾銅鋅超氧化物歧化酶的研究[D];江南大學(xué);2010年

2 韓依辰;基因治療用質(zhì)粒DNA生產(chǎn)及產(chǎn)物純化的研究[D];長春工業(yè)大學(xué);2010年

3 呂名蕊;磷脂酰膽堿富集及熱原去除的研究[D];江南大學(xué);2010年

4 李現(xiàn)麗;重組蛋白GGH的分離純化及藥效學(xué)初步評價(jià)[D];江南大學(xué);2011年

5 管占利;重組人胸腺素Tα1工藝的研究[D];長春工業(yè)大學(xué);2011年

6 張淑芳;重組MUC1-MBP融合蛋白抗腫瘤作用機(jī)制及其安全性的研究[D];吉林大學(xué);2004年

7 肖婧凡;羥基丁酸和羥基辛酸共聚體的發(fā)酵生產(chǎn)及其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用研究[D];山西大學(xué);2006年

8 孫博;質(zhì)粒D-GPEi純化工藝及質(zhì)量檢測研究[D];吉林大學(xué);2006年

9 趙玉娟;免疫牛初乳免疫球蛋白加工處理穩(wěn)定性的研究[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

10 高航;重組鼠源Muc1融合蛋白的制備及免疫活性初步研究[D];吉林大學(xué);2006年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 唱韶紅;鞏新;楊志愉;王同映;馬國昌;馬清鈞;吳軍;;人血清白蛋白和人干擾素α2b的融合蛋白在畢赤酵母中的表達(dá)[J];生物工程學(xué)報(bào);2006年02期

2 商振華,周冬梅,郭為,于億年,周良模,潘明臣,周康;聚酰胺親和膜用于去除內(nèi)毒素的研究 Ⅰ，

本文編號：721013