本文關鍵詞：超濾技術去除重組MUC1-MBP融合蛋白中內毒素的效果評價

  更多相關文章： MUC-MBP融合蛋白 離子交換層析 疏水層析 超濾技術 內毒素 顯色基質法鱟試劑

【摘要】：目的:評價超濾技術去除純化后重組MUC1-MBP融合蛋白(MUC1-MBP)溶液中內毒素的效果,闡明超濾技術對去除內毒素的作用。方法:選取表達MUC1-MBP大腸桿菌基因工程菌,分別通過CM Sepharose FF離子交換層析(CM)(CM組)、CM聯(lián)合Phenyl Sepharose 6FF疏水層析(C6)(CM+C6組)、CM加超濾(CM+超濾組)以及CM聯(lián)合C6加超濾(CM+C6組+超濾)進行純化,并去除內毒素;采用SDS-PAGE分析蛋白純度;鱟試劑顯色基質法檢測內毒素表達水平。結果:SDS-PAGE分析,在預期相對分子質量62 000處呈現(xiàn)單一條帶,Quantity One分析純度96%;CM組與CM+C6組內毒素表達水平均較高,但2組比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);與CM組比較,CM+超濾組內毒素表達水平明顯降低(P0.01);與CM+C6組比較,CM+C6超濾組內毒素表達水平明顯降低(P0.01);CM+超濾組與CM+C6+超濾組內毒素表達水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論:CM或CM聯(lián)合C6均不能有效去除內毒素,其中C6對去除內毒素幾乎無作用;CM加超濾可有效去除內毒素,超濾技術在去除內毒素中發(fā)揮重要作用。
【作者單位】： 吉林大學基礎醫(yī)學院免疫學教研室;
【關鍵詞】： MUC-MBP融合蛋白 離子交換層析 疏水層析 超濾技術 內毒素 顯色基質法鱟試劑
【基金】：科技部“十二五”重大新藥創(chuàng)制專項資助課題(2011ZX09102001-36)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： MUC1-MBP是本實驗室將編碼人類MUC1基因按正確閱讀框插入高效表達麥芽糖結合蛋白(maltose binding protein,MBP)的載體pMAL-p2中,構建了表達MUC1-MBP的重組質粒,然后在大腸桿菌中通過擴增培養(yǎng)、IPTG誘導表達及一系列純化工藝得到的重組MUC1-MBP融合蛋白[1]。內毒素的化學本質

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本文編號：721013