本文關(guān)鍵詞：肝素結(jié)合血凝素通過抑制A549細(xì)胞的自噬作用增強(qiáng)恥垢分枝桿菌的感染能力

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【摘要】：目的將肝素結(jié)合血凝素(HBHA)重組表達(dá)于恥垢分枝桿菌(MS),鑒定其對(duì)A549細(xì)胞自噬作用的影響。方法將HBHA克隆于穿梭表達(dá)質(zhì)粒pMV261,構(gòu)建HBHA重組載體,電轉(zhuǎn)化至MS;感染A549細(xì)胞,Western blot法鑒定A549細(xì)胞微管相關(guān)蛋白輕鏈3(LC3)的表達(dá)情況,并檢測(cè)LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值的變化可估計(jì)自噬的水平;利用單丹磺酰尸胺(MDC)將自噬體染色后,激光共聚焦觀察細(xì)胞內(nèi)自噬體變化的情況;通過MS、rMS-HBHA感染A549細(xì)胞18 h,計(jì)算胞內(nèi)活菌數(shù),鑒定感染狀況。結(jié)果 rMS-HBHA經(jīng)42℃熱誘導(dǎo)成功表達(dá)HBHA蛋白;相對(duì)野生型MS,重組表達(dá)HBHA蛋白的MS(rMS-HBHA)可以顯著抑制A549細(xì)胞中的LC3Ⅰ和LC3Ⅱ的表達(dá),rMS-HBHA組的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值為0.625顯著低于MS組2.025,表明rMS-HBHA組自噬體形成受到抑制;并且rMS-HBHA感染A549細(xì)胞18 h后胞內(nèi)活菌為6.3×106,明顯高于MS組1×105。結(jié)論外源性HBHA可以通過抑制A549細(xì)胞的自噬作用增強(qiáng)MS的感染能力。
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： rMS 肝素結(jié)合血凝素 A細(xì)胞 LC 恥垢分枝桿菌
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30872358)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 全球有1/3的人口感染結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis,MTB),我國(guó)是結(jié)核病(tuberculosis,TB)負(fù)擔(dān)大國(guó),約有5.5億人感染MTB,極大地影響了人們的健康[1-2]。因此闡明MTB的感染機(jī)制,對(duì)于防治策略和方法的研究具有重要意義。MTB的感染機(jī)制不僅僅與巨噬細(xì)胞存在密切關(guān)系[3-6

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：718402