本文關(guān)鍵詞：不可分型流感嗜血桿菌P6重組蛋白的原核表達(dá)及其黏膜免疫效應(yīng)

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【摘要】：目的:研究不可分型流感嗜血桿菌重組P6蛋白的免疫原性,以確定重組P6蛋白在不可分型流感嗜血桿菌疫苗研制中的應(yīng)用價(jià)值。方法:擴(kuò)增P6目的基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒PGEX-6P2/P6,鑒定后將其轉(zhuǎn)化入E.coli XL1-Blue,IPTG誘導(dǎo)、純化后經(jīng)SDS-PAGE、Western blot分析;純化的重組蛋白經(jīng)滴鼻方式免疫BALB/c小鼠,ELISA法檢測血清IgG,肺灌洗液IgA的水平及脾細(xì)胞中IL-4、IL-10、IL-17和IFN-γ的產(chǎn)生水平。CCK-8法檢測脾淋巴細(xì)胞增殖情況。結(jié)果:成功構(gòu)建了重組表達(dá)載體PGEX-6P2/P6,并表達(dá)GST-P6融合蛋白。Western blot證明GST-P6蛋白能與菌源P6蛋白免疫小鼠后的抗血清發(fā)生特異性反應(yīng)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明重組P6蛋白通過滴鼻途徑既能刺激小鼠產(chǎn)生血清IgG,又能誘導(dǎo)肺黏膜產(chǎn)生較高的特異性IgA抗體。重組蛋白+IL-2組小鼠脾淋巴細(xì)胞所產(chǎn)生的IL-17和IFN-γ的含量高于對照組(P0.05)。結(jié)論:P6蛋白的原核表達(dá)載體PGEX-6P2/P6在大腸桿菌XL1-Blue中大量表達(dá),重組P6蛋白經(jīng)黏膜免疫可以同時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫。此實(shí)驗(yàn)為P6蛋白疫苗的研發(fā)提供了理論基礎(chǔ)。
【作者單位】： 河北北方學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 不可分型流感嗜血桿菌 外膜蛋白P 原核表達(dá) 黏膜免疫效應(yīng)
【基金】：河北北方學(xué)院青年基金
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 不可分型流感嗜血桿菌(Nontypeable Hae-mophilus Influenzae,NTHi)是一類沒有莢膜的革蘭陰性桿菌,是引起兒童呼吸道細(xì)菌性感染的主要病原體之一。寄居于約40%的健康成人和80%的健康兒童的咽部,常引起呼吸道反復(fù)感染及引發(fā)中耳炎和鼻竇炎等疾病[1,2]。近年來,細(xì)菌的耐藥性不斷

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本文編號：702063