本文關(guān)鍵詞：GⅡ型諾如病毒衣殼蛋白抗原表位預(yù)測及單克隆抗體的制備

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【摘要】：目的原核表達諾如病毒衣殼蛋白VP1,制備抗諾如病毒衣殼蛋白VP1的單克隆抗體,并研究其抗原表位特性。方法 PCR擴增GⅡ型湖州株諾如病毒VP1蛋白基因,將目的基因克隆至載體pET28a(+),轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌原核表達。純化表達產(chǎn)物免疫BALB/c小鼠,將成功免疫的小鼠脾細胞與骨髓瘤SP2/0細胞融合。用Modeller9.9為諾如病毒GⅡ型湖州株VP1蛋白構(gòu)建三維模型,構(gòu)建好的三維模型提交到SEPPA在線B-cell空間表位預(yù)測軟件,對GⅡ型湖州株VP1蛋白進行空間表位預(yù)測。用預(yù)測的表位序列來篩選陽性克隆,得到對應(yīng)這些表位的單克隆抗體。結(jié)果成功構(gòu)建重組表達載體pET28a(+)-Noro-VP1并在大腸埃希菌中獲得表達,重組蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾細胞與SP2/0細胞融合,用預(yù)測的抗原表位多肽篩選,獲得10株雜交瘤細胞株。與重組蛋白的ELISA結(jié)果顯示1E8、1P10、2C15和2L16四株反應(yīng)性最強,其他幾株反應(yīng)性較弱。Western blotting結(jié)果顯示只有2K10、1K16、1E8三株能與重組蛋白很好的結(jié)合。結(jié)論成功制備了抗GⅡ型湖州株諾如病毒VP1蛋白的單克隆抗體,抗原表位位于衣殼蛋白的P2區(qū),為制備諾如病毒快速免疫診斷試劑盒及抗原表位的研究提供基礎(chǔ)。
【作者單位】： 湖州市疾病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 諾如病毒 衣殼蛋白 單克隆抗體 抗原表位
【分類號】：R392
【正文快照】： 人類諾如病毒(Noroviruses,NoV)又稱諾瓦克樣病毒(Norwalk-like viruses),是杯狀病毒家族主要成員,為單股正鏈RNA病毒。NoV是引起急性流行性胃腸炎的常見致病原[1]。有報道稱,在美國超過42%的非細菌性胃腸炎暴發(fā)都是由NoV引起的[2]。由于NoV容易突變,存在多種抗原的類型和基

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本文編號：701238