本文關(guān)鍵詞：TAT-Cytoglobin融合蛋白的原核表達(dá)、純化及生物活性分析

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【摘要】：旨在利用細(xì)胞穿膜肽TAT的穿膜作用和細(xì)胞珠蛋白(Cytoglobin,Cygb)的抗衰老、抗纖維化的功能,將二者通過基因工程的手段融合在一起,以期獲得能夠穿透細(xì)胞屏障的Cygb。通過兩次重疊PCR技術(shù)獲得了TAT-Cygb DNA,將其插入原核表達(dá)載體pET22b質(zhì)粒中,轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL-21,篩選出可表達(dá)TAT-Cygb融合蛋白的大腸桿菌工程菌株。經(jīng)乳糖誘導(dǎo)表達(dá)TAT-Cygb,CM陽(yáng)離子交換層析(CM Sepharose Fast Flow Protocol)獲得純度高達(dá)95%的TAT-Cygb融合蛋白,分子量約23 kDa。生物活性實(shí)驗(yàn)顯示,TAT-Cygb過氧化物酶比活力達(dá)到(422.30±0.36)U/mg。TAT-Cygb預(yù)處理的Hacat細(xì)胞可免受H2O2氧化應(yīng)激的損傷(RGR=100%),同時(shí)TAT-Cygb可治療已被H2O2氧化損傷的細(xì)胞(RGR=98%),與Cygb處理組相比具有顯著差異(RGR=79%)。該研究首次成功利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了可穿透細(xì)胞膜的、有生物活性的TAT-Cygb融合蛋白,為繼續(xù)開展Cygb在抗衰老、抗纖維化和抗癌領(lǐng)域的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 華僑大學(xué)生物醫(yī)學(xué)學(xué)院;分子藥物教育部工程研究中心;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)胞穿膜肽 細(xì)胞珠蛋白 融合蛋白 純化 氧化應(yīng)激
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(Nos.81072578,81271692)資助~~
【分類號(hào)】：R3411
【正文快照】： 細(xì)胞珠蛋白(Cytoglobin,Cygb)是由190個(gè)氨基酸組成、分子量為21.4 kDa的一種細(xì)胞內(nèi)球蛋白,在高等脊椎動(dòng)物各組織中廣泛分布[1],最初由Kawada等在大鼠肝星狀細(xì)胞(Hepatistellate cells,HSC)中發(fā)現(xiàn)[2]。研究表明Cygb具有過氧化物酶活性,可清除氧自由基,因此可保護(hù)組織免受氧化應(yīng)

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7 記者　黃每裕;治療性乙肝疫苗進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

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1 侯s，

本文編號(hào)：690292