本文關(guān)鍵詞：氧氟沙星噬菌體庫的構(gòu)建、篩選及抗體結(jié)構(gòu)模擬

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【摘要】：應(yīng)用噬菌體展示和重組抗體技術(shù)制備抗氧氟沙星單鏈抗體(scFv)庫,篩選獲得氧氟沙星特異性噬菌體scFv以及同源模擬其三維結(jié)構(gòu)。將從氧氟沙星雜交瘤細(xì)胞提取的總RNA,用RT-PCR反轉(zhuǎn)錄合成cDNA,以針對鼠源重鏈可變區(qū)(VH)及輕鏈可變區(qū)(VL)基因的兼并引物,擴(kuò)增獲得VH和VL可變區(qū)基因,通過SOE-PCR法將VH基因和VL基因通過柔性多肽Linker(Gly4Ser)3拼接成全長scFv基因片段,將雙酶切后的scFv基因片段插入T7噬菌體,經(jīng)體外包裝后轉(zhuǎn)化宿主菌BLT5403,成功構(gòu)建庫容量為3×105pfu/mL的抗體庫,經(jīng)4輪吸附-洗脫-擴(kuò)增的富集,采用直接競爭ELISA篩選到4個特異性噬菌體scFv,運(yùn)用Expasy軟件模擬特異性scFv的三維結(jié)構(gòu)。為進(jìn)一步大量表達(dá)氧氟沙星單鏈抗體奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 河北北方學(xué)院;天津科技大學(xué)教育部食品營養(yǎng)與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 氧氟沙星 單鏈抗體 噬菌體展示 酶聯(lián)免疫分析
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.20905058) 張家口市科技攻關(guān)項(xiàng)目(No.1311018C-3)資助~~
【分類號】：R392
【正文快照】： 1引言氧氟沙星(Ofloxacin)為第三代喹諾酮類抗菌藥,抗菌譜廣,對革蘭氏陽性菌及陰性菌均有強(qiáng)大的抗菌作用,對厭氧菌和肺炎支原體也有良好作用,廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)生產(chǎn)中。喹諾酮類藥物對人體有一定副作用,包括對胃腸道不良反應(yīng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)不良反應(yīng)、心臟的毒性作用[1],在牲畜

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