本文關鍵詞：復方貞術(shù)調(diào)脂方對晝夜節(jié)律失調(diào)所致糖脂代謝紊亂小鼠模型的干預作用及機制研究

  更多相關文章： 糖脂代謝紊亂 晝夜節(jié)律失調(diào) 復方貞術(shù)調(diào)脂方 生物鐘基因 PPARγ

【摘要】：目的:本研究通過構(gòu)建晝夜節(jié)律失調(diào)所致糖脂代謝紊亂的小鼠模型,應用“調(diào)肝啟樞化濁”理論代表方——復方貞術(shù)調(diào)脂方(FTZ)對該模型進行干預,并探討其作用機制。方法:1、糖脂代謝紊亂小鼠模型的構(gòu)建。取6周齡左右C57BL/6J雄性小鼠104只,分為4組,即:空白組(CON,8只,白天光照,晚上黑暗)、24h小時光照組(24hL,36只,白天光照,晚上光照)、24h小時黑暗組(24hD,36只,白天黑暗,晚上黑暗)、飲食和光照紊亂組(RFL,36只,白天黑暗,晚上光照)。CON、24hL、24hD組自由進食;RFL組白天進食,晚上禁食;持續(xù)時間12周。通過動態(tài)監(jiān)測小鼠白天/晚上進食量、體重、糖代謝指標(FBG、FINS、OGTT、ITT)、脂代謝指標(TC、TG、HDL-C、LDL-C)判斷模型是否建立成功。2、FTZ對糖脂代謝紊亂小鼠模型的干預作用及機制研究。取方法1中24hL、24hD、RFL組小鼠,每組又分為4小組,每小組8只,即:對照組、羅格列酮組、FTZ高劑量組、FTZ低劑量組。一共為13組,給藥8周。動態(tài)監(jiān)測小鼠白天/晚上進食量、體重;第9周測定小鼠糖、脂代謝指標;第10周,根據(jù)Zeitgeber Time(開始光照時間記為ZT0),各組別在ZTO(8:00am)、ZT6(2:00pm)、ZT12(8:00pm)、ZT18(2:00am)4個時間點(各2只)處死小鼠。取小鼠肝臟、附睪脂肪、腎周脂肪,計算小鼠肝臟指數(shù)、體脂比;測肝臟TC、TG含量;對小鼠肝臟進行組織固定,制作肝臟病理組織切片;提取肝臟總RNA,采用RT-PCR檢測肝臟時鐘基因mClock、mBmal1、mCry1以及糖脂代謝相關基因PPARγ的實時動態(tài)的表達量。結(jié)果:1、經(jīng)過12周的造模,24hL、24hD、RFL組與CON組比較,體重明顯增加(p0.05);小鼠飲食規(guī)律發(fā)生變化,白天/晚上進食比例改變;24hL、24hD、RFL組TG、LDL-C、FBG、FINS均高于CON組(p0.05),24hL、24hD組TC水平較CON組高(p0.05),但RFL組無統(tǒng)計學意義(p0.05),RFL組HDL-C水平與CON組相比明顯降低(p0.05),而24hL、24hD組卻無統(tǒng)計學意義(p0.05);24hL、24hD、RFL組HOMA-IR和ISI與CON組相比明顯增高,具有統(tǒng)計學意義(p0.05);OGTT實驗中,相同時間點的血糖濃度各組間無差異(p0.05),但AUC顯示24hL、24hD組與CON組相比明顯升高(p0.05),RFL組無統(tǒng)計學意義(p0.05),24hL、24hD、RFL組的ITT實驗AUC和CON組相比,明顯升高(p0.05)。2、經(jīng)過8周的藥物治療,FTZ略微降低小鼠的進食量,小鼠體重有下降的趨勢(無顯著差異);FTZ降低LCON、DCON、RCON組小鼠血清TC、LDL-C、FBG、FINS水平(p0.05);FTZ治療LCON、DCON、RCON組小鼠后,改善HOMA-IR、ISI、AUC(ITT)(p0.05),LCON、DCON、RCON組小鼠肝臟中TC、TG水平下降明顯,減輕體內(nèi)脂肪、體脂比、肝臟指數(shù),且具有顯著性差異(p0.05),不同程度的緩解LCON、DCON、RCON組小鼠肝臟組織病變。但FTZ降低LCON、DCON、RCON組小鼠血清TG、AUC(OGTT)以及升高LCON、DCON、RCON組小鼠血清HDLC效果不明顯(p0.05)。LCON、DCON、RCON組與CON組相比,肝臟組織中mBmal1、mCry1和PPARγ基因總表達量升高或基因表達節(jié)律改變;FTZ能夠改善Cry1和PPARγ基因表達總量或者恢復其表達節(jié)律,FTZ對Bmal1基因表達節(jié)律性作用不明顯,但對振幅有一定的影響。結(jié)論:1、經(jīng)過12周改變小鼠光照或進食時間,成功構(gòu)建晝夜節(jié)律失調(diào)所致糖脂代謝紊亂的小鼠模型。2、模型小鼠經(jīng)過FTZ治療8周后,FTZ明顯改善小鼠糖脂代謝,其作用機制可能是恢復小鼠肝臟Cry1及PPARγ基因表達的節(jié)律性。
【關鍵詞】：糖脂代謝紊亂 晝夜節(jié)律失調(diào) 復方貞術(shù)調(diào)脂方 生物鐘基因 PPARγ
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 摘要8-10
• Abstract10-13
• 第一章 緒言13-22
• 1 晝夜節(jié)律基因的研究進展13-14
• 2 晝夜節(jié)律與糖脂代謝14-17
• 3 晝夜節(jié)律紊亂模型的研究進展17-19
• 4 晝夜節(jié)律紊亂與治療藥物19-20
• 5 FTZ前期研究進展20-21
• 6 本課題的提出21-22
• 第二章 晝夜節(jié)律失調(diào)所致糖脂代謝紊亂小鼠模型的建立22-37
• 2.1 材料22-24
• 2.1.1 實驗動物22
• 2.1.2 實驗主要儀器22-23
• 2.1.3 實驗主要試劑23
• 2.1.4 試劑的配制23-24
• 2.2 方法24-29
• 2.2.1 動物分組24
• 2.2.2 指標檢測24-27
• 2.2.3 測定原理27-28
• 2.2.4 統(tǒng)計分析28-29
• 2.3 結(jié)果29-35
• 2.3.1 各建模方法對小鼠每日飲食攝入量、白天/晚上攝入比例、體重的影響29-31
• 2.3.2 各建模方法對小鼠血脂代謝的影響31-33
• 2.3.3 各建模方法對小鼠血糖代謝的影響33-35
• 2.4 討論35-36
• 2.5 結(jié)論36-37
• 第三章 FTZ對晝夜節(jié)律失調(diào)所致糖脂代謝紊亂小鼠模型的影響37-61
• 3.1 材料37-39
• 3.1.1 實驗動物37
• 3.1.2 實驗主要試劑37-38
• 3.1.3 實驗主要儀器38
• 3.1.4 試劑的配制38-39
• 3.2 方法39-44
• 3.2.1 動物分組39
• 3.2.2 試驗藥物39
• 3.2.3 指標檢測39-41
• 3.2.4 測定原理41
• 3.2.5 小鼠的處理41-43
• 3.2.6 統(tǒng)計分析43-44
• 3.3 結(jié)果44-60
• 3.3.1 FTZ對小鼠每日飲食攝入量、體重增加量、白天/晚上攝入比例的影響44-46
• 3.3.2 FTZ對小鼠血脂代謝的影響46-49
• 3.3.3 FTZ對小鼠血糖代謝的影響49-54
• 3.3.4 FTZ對小鼠體脂重量、體脂比、臟肝指數(shù)的影響54-56
• 3.3.5 FTZ對小鼠肝臟TC、TG水平的影響56-58
• 3.3.6 FTZ對小鼠肝臟整體及肝臟組織石蠟切片的影響58-60
• 3.4 討論60
• 3.5 結(jié)論60-61
• 第四章 FTZ對晝夜節(jié)律失調(diào)小鼠肝臟的生物鐘基因及脂質(zhì)因子的影響61-70
• 4.1 材料61-62
• 4.1.1 實驗材料61-62
• 4.1.2 主要試劑62
• 4.2 方法62-65
• 4.2.1 引物的設計和分裝62-63
• 4.2.2 小鼠肝臟總RNA的提取63-64
• 4.2.3 逆轉(zhuǎn)錄反應64-65
• 4.2.4 實時熒光定量 PCR 反應65
• 4.2.5 統(tǒng)計分析65
• 4.3 結(jié)果65-69
• 4.4 討論69
• 4.5 結(jié)論69-70
• 第五章 總結(jié)與展望70-71
• 參考文獻71-76
• 攻讀碩士期間發(fā)表的論文76-77
• 中英文縮略表77-78
• 致謝78

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