本文關(guān)鍵詞：含EB病毒核抗原1重組腺病毒的構(gòu)建及其在小鼠中免疫效果研究

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【摘要】：構(gòu)建含EB病毒核抗原1(ebna1)重組腺病毒疫苗防治鼻咽癌,并為鼻咽癌疫苗的研究提供藥效學(xué)資料。PCR法擴增B95-8細胞株中ebna1的C-端部分片段,EcoRI和BglⅡ酶切后插入pDC316穿梭質(zhì)粒,ebna1片段測序比對正確后,與腺病毒骨架質(zhì)粒pBHG共轉(zhuǎn)染293細胞。收集病變后細胞,通過流式細胞儀和Western blot檢測EBNA1在293細胞中的表達。電鏡下觀察所獲得的病毒顆粒大小,TCID50法確定重組腺病毒滴度。以2×108 VP/只的rAd-ebna1免疫BALB/c小鼠。在免疫結(jié)束后的第1、2、4和8周檢測小鼠體內(nèi)EBNA1特異性細胞免疫應(yīng)答的水平變化。結(jié)果顯示,經(jīng)PCR擴增獲得約900bp ebna1目的片段,測序結(jié)果與標準株序列一致,質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細胞后,細胞出現(xiàn)病變,獲得含EB病毒核抗原1重組腺病毒(rAd-ebna1),流式細胞儀和Western blot檢測結(jié)果證實,ebna1在細胞中正確轉(zhuǎn)錄表達,收獲病毒二代滴度可達108 TCID50/mL。rAd-ebna1免疫小鼠后,能夠激活EBNA1的CD4+T細胞特異性細胞免疫應(yīng)答。本實驗成功構(gòu)建了含ebna1片段的重組腺病毒,并具激活CD4+T細胞免疫應(yīng)答活性。
【作者單位】： 北京工業(yè)大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院;中國疾病預(yù)防控制中心病毒病預(yù)防控制所傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： EBNA(EB病毒核抗原) 重組腺病毒 疫苗
【基金】：國家“973”項目:病毒潛伏感染的分子機制(2011CB504800) 國家“863”項目:病毒性鼻咽癌疫苗關(guān)鍵技術(shù)研究及產(chǎn)品開發(fā)(2012AA02A404) 環(huán)境與病毒腫瘤學(xué)北京市重點實驗室開放課題項目EBNA1特異性細胞免疫與鼻咽癌發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究(EV02012021)
【分類號】：R373;R392
【正文快照】： 鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我國南方及東南亞一些地區(qū)常見的惡性腫瘤之一。20世紀60~70年代系列研究和實踐證實NPC的發(fā)生發(fā)展與EB病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染密切相關(guān),在鼻咽癌患者的腫瘤組織中有EB病毒EBNA1、LMP1、LMP2的表達[1]。EBV是第一個被認為與人

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