應(yīng)用免疫磁珠分離法純化弓形蟲速殖子的研究
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【摘要】:目的用免疫磁珠分離法分選弓形蟲速殖子,以去除宿主細(xì)胞成分,并盡可能對(duì)蟲體的生物學(xué)特性無不良影響,為弓形蟲的基礎(chǔ)與臨床研究提供技術(shù)基礎(chǔ)。方法采用弓形蟲Wh3株(China 1基因型)速殖子感染小鼠,提取腹腔液,常規(guī)方法制備速殖子可溶性抗原,免疫家兔,獲得兔抗弓形蟲多克隆IgG抗體。用抗體包被的免疫磁珠對(duì)小鼠腹腔液內(nèi)弓形蟲速殖子進(jìn)行純化,比較其純度、回收率、蟲體活力、毒力與感染性。結(jié)果用免疫磁珠分離技術(shù)純化弓形蟲速殖子后,其純度提高到98.2%,細(xì)胞清除率為96%,蟲體回收率為73.5%;用內(nèi)鹽法(MTS)細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)分離后的速殖子活性為95.6%。定量分組感染小鼠后死亡時(shí)間無顯著性差異。結(jié)論免疫磁珠分離的速殖子純度、細(xì)胞清除率和蟲體回收率較高,能有效去除宿主細(xì)胞,且對(duì)速殖子的活性和毒力無影響。該法操作簡(jiǎn)便快速,無需昂貴的儀器設(shè)備,具有較大的實(shí)用價(jià)值。
【作者單位】: 安徽醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)教研室 安徽病原生物學(xué)省級(jí)實(shí)驗(yàn)室 安徽省人獸共患病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;安徽醫(yī)學(xué)高等?茖W(xué)校病原生物學(xué)與免疫學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】: 弓形蟲 速殖子 純化 免疫磁珠分離
【基金】:國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃資助(973計(jì)劃)(編號(hào):2010CB530001)
【分類號(hào)】:R382
【正文快照】: 弓形蟲是一種廣泛寄生于人和多種動(dòng)物有核細(xì)胞內(nèi)的機(jī)會(huì)致病性原蟲,能造成多臟器和組織損害而引起人畜共患的弓形蟲病。弓形蟲病分布廣泛,據(jù)文獻(xiàn)[1]報(bào)道全球約有1/3人血清試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)。由于該蟲是有核細(xì)胞內(nèi)的專性寄生原蟲,因此在弓形蟲和弓形蟲病的基礎(chǔ)和臨床研究中,以及
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