本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 結(jié)核分枝桿菌 優(yōu)勢(shì)抗原 共表達(dá) 蛋白免疫印跡

【摘要】：CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B是結(jié)核分枝桿菌的主要免疫優(yōu)勢(shì)抗原。為了構(gòu)建一種可同時(shí)表達(dá)這4種抗原的真核多基因共表達(dá)載體pcDNA-CFP10-ESAT6-Ag85A-Ag85B(pcDNA-CEAB),并利用HEK 293T細(xì)胞對(duì)其體外表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。采用酶切、連接的方法,將CFP10和ESAT6編碼基因以(Gly4Ser)3蛋白Linker連接,插入至質(zhì)粒pcDNA3.1(+)多克隆位點(diǎn)CMV啟動(dòng)子與加尾信號(hào)BGH pA之間,使兩者融合表達(dá),將Ag85A和Ag85B編碼基因以內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)(Internal ribosome entry site,IRES)序列連接,并賦予RSV啟動(dòng)子和加尾信號(hào)BGH pA,使兩者在RSV啟動(dòng)子作用下獨(dú)立表達(dá)。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切及測(cè)序驗(yàn)證后轉(zhuǎn)染至HEK 293T細(xì)胞中進(jìn)行體外表達(dá)實(shí)驗(yàn),48 h后提取總蛋白,利用CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B特異性抗體進(jìn)行Western blotting檢測(cè)。結(jié)果顯示多基因共表達(dá)載體pcDNA-CEAB在真核細(xì)胞HEK 293T中得到表達(dá),且CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原能被相應(yīng)的特異性抗體所識(shí)別,表明質(zhì)粒pcDNA-CEAB構(gòu)建正確,這為進(jìn)一步研究其免疫原性和免疫保護(hù)效果奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 寧夏大學(xué)西部特色生物資源保護(hù)與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 優(yōu)勢(shì)抗原 共表達(dá) 蛋白免疫印跡
【基金】：國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)(Nos.2012CB126301,2012CB518801) 國(guó)家自然科學(xué)基金(No.31160515) 高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(No.20126401110001) 國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.2012BAD12B07-4)資助~~
【分類號(hào)】：R378;S852.61
【正文快照】： 結(jié)核病(Tuberculosis,TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的慢性致死性人獸共患性傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì),全世界大約有1/3的人群感染MTB。近年來,隨著多重耐藥性菌株的不斷出現(xiàn),MTB與艾滋病共感染等情況更加劇了全球結(jié)核病負(fù)擔(dān)[1-2]。我國(guó)是世界上

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本文編號(hào)：655185