本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表達載體的構(gòu)建與表達

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【摘要】：CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B是結(jié)核分枝桿菌的主要免疫優(yōu)勢抗原。為了構(gòu)建一種可同時表達這4種抗原的真核多基因共表達載體pcDNA-CFP10-ESAT6-Ag85A-Ag85B(pcDNA-CEAB),并利用HEK 293T細胞對其體外表達進行檢測。采用酶切、連接的方法,將CFP10和ESAT6編碼基因以(Gly4Ser)3蛋白Linker連接,插入至質(zhì)粒pcDNA3.1(+)多克隆位點CMV啟動子與加尾信號BGH pA之間,使兩者融合表達,將Ag85A和Ag85B編碼基因以內(nèi)部核糖體進入位點(Internal ribosome entry site,IRES)序列連接,并賦予RSV啟動子和加尾信號BGH pA,使兩者在RSV啟動子作用下獨立表達。重組質(zhì)粒經(jīng)酶切及測序驗證后轉(zhuǎn)染至HEK 293T細胞中進行體外表達實驗,48 h后提取總蛋白,利用CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B特異性抗體進行Western blotting檢測。結(jié)果顯示多基因共表達載體pcDNA-CEAB在真核細胞HEK 293T中得到表達,且CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原能被相應的特異性抗體所識別,表明質(zhì)粒pcDNA-CEAB構(gòu)建正確,這為進一步研究其免疫原性和免疫保護效果奠定了基礎。
【作者單位】： 寧夏大學西部特色生物資源保護與利用教育部重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 結(jié)核分枝桿菌 優(yōu)勢抗原 共表達 蛋白免疫印跡
【基金】：國家重點基礎研究發(fā)展計劃(973計劃)(Nos.2012CB126301,2012CB518801) 國家自然科學基金(No.31160515) 高等學校博士學科點專項科研基金(No.20126401110001) 國家科技支撐計劃項目(No.2012BAD12B07-4)資助~~
【分類號】：R378;S852.61
【正文快照】： 結(jié)核病(Tuberculosis,TB)是由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的慢性致死性人獸共患性傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計,全世界大約有1/3的人群感染MTB。近年來,隨著多重耐藥性菌株的不斷出現(xiàn),MTB與艾滋病共感染等情況更加劇了全球結(jié)核病負擔[1-2]。我國是世界上

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