本文關(guān)鍵詞：難轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞OCI-LY8慢病毒過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建

  更多相關(guān)文章： Fbw 慢病毒載體 懸浮細(xì)胞 人淋巴瘤細(xì)胞 感染 熒光效率

【摘要】：目的探討難轉(zhuǎn)染懸浮細(xì)胞慢病毒過表達(dá)穩(wěn)定細(xì)胞株的構(gòu)建方法。方法選用人彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)細(xì)胞株OCI-LY8為研究對象,分別用Fbw7基因的慢病毒原液、慢病毒濃縮液、慢病毒濃縮液加入終濃度為5μg/mL的1,5-二甲基-1,5-二氮十一亞甲基聚甲溴化物(polybrene)、慢病毒濃縮液加入終濃度為10μg/mL的polybrene 4種方式進(jìn)行感染。因慢病毒載體含有綠色熒光蛋白報告基因,故通過倒置熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)熒光的數(shù)量及強度來評判上述4種方式的感染效率,并用Real-time PCR和Western blot進(jìn)行驗證。結(jié)果慢病毒原液的感染效率極低,僅在少許細(xì)胞中看到極微弱的熒光;慢病毒濃縮液的感染效率尚可,約有60%的細(xì)胞可以觀察到微弱的熒光;慢病毒濃縮液中加入5μg/mL polybrene的感染效率較高,約90%的細(xì)胞可以觀察到較強的熒光;慢病毒濃縮液中加入10μg/mL polybrene的感染效率極高,幾乎全部細(xì)胞均可以觀察到很強的熒光。結(jié)論慢病毒濃縮液中加入合適濃度的polybrene是感染DLBCL細(xì)胞株OCI-LY8較為有效的方法。慢病毒的感染效率與細(xì)胞的狀態(tài)、感染復(fù)數(shù)、polybrene的濃度密切相關(guān)。
【作者單位】： 汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院;廣東省人民醫(yī)院(廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院)病理醫(yī)學(xué)部病理科;
【關(guān)鍵詞】： Fbw 慢病毒載體 懸浮細(xì)胞 人淋巴瘤細(xì)胞 感染 熒光效率
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項目(編號:81172244)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： Fbw7(F-box and WD40 repeat domain-contai-ning 7)又稱Fbxw7、Sel-10、AGO和hCDC4,是定位于4q31的抑癌基因,其編碼的蛋白Fbw7可介導(dǎo)許多重要蛋白質(zhì)的泛素化。目前,已在很多人體腫瘤中檢測到Fbw7的功能缺失及其底物累積[1-2],然而該基因是否參與彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(DLBCL)的

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本文編號：642501