本文關(guān)鍵詞：新生大鼠肺成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)改良法及細(xì)胞鑒定

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【摘要】：探討新生大鼠肺成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)的改良方法及細(xì)胞鑒定。用胰酶消化組織塊結(jié)合的方法提取新生大鼠肺成纖維細(xì)胞,并純化細(xì)胞,對(duì)肺成纖維細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察,用HE染色及免疫組化染色法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定,并用MTT法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。倒置相差顯微鏡下觀察選用改良法獲得的細(xì)胞,3 d后可見(jiàn)組織塊周邊有少許細(xì)胞,5 d后組織塊周圍有大量細(xì)胞爬出,生長(zhǎng)迅速,10 d接近融合。經(jīng)改良后的方法純化細(xì)胞,細(xì)胞活性狀態(tài)較好的為3~5代,5代以后的細(xì)胞增殖能力下降。對(duì)第3代肺成纖維細(xì)胞進(jìn)行HE染色,鏡下可見(jiàn)形態(tài)典型的成纖維細(xì)胞,免疫組化結(jié)果顯示波形蛋白(Vi-mentin)陽(yáng)性表達(dá),細(xì)胞角蛋白(cytokeratin)陰性表達(dá)。MTT法檢測(cè)第3代細(xì)胞于3~5 d處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。胰酶消化組織塊結(jié)合法是一種可靠快速的肺成纖維細(xì)胞分離純化的培養(yǎng)方法,使用這種方法可得到具有典型形態(tài)特征且活性較好的肺成纖維細(xì)胞,初學(xué)者容易掌握。
【作者單位】： 武漢大學(xué)中南醫(yī)院呼吸內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 肺成纖維細(xì)胞 原代培養(yǎng) 改良培養(yǎng)法 細(xì)胞鑒定
【基金】：湖北省自然科學(xué)基金(2011CDB527)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 肺成纖維細(xì)胞(lung fibroblast,LF)是體內(nèi)外研究肺纖維化及其他肺部疾病的主要細(xì)胞[1],原代新生大鼠的肺成纖維細(xì)胞由于直接來(lái)源于機(jī)體組織,生物性狀尚未發(fā)生較大的變化,能較好反應(yīng)體內(nèi)的生長(zhǎng)特性,因此廣泛用于藥理、毒理、藥效試驗(yàn)。本文主要探討新生大鼠肺成纖維細(xì)胞原代培

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 黃錦桃;劉愛(ài)軍;侯春蓮;朱永紅;李海標(biāo);;胎鼠肺成纖維細(xì)胞的改良培養(yǎng)法[J];解剖學(xué)研究;2005年04期

2 劉方;龍治峰;龍雙漣;;新生大鼠成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)[J];南華大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年04期

3 鄧佳慧;肖軍花;王嘉陵;;成年小鼠肺成纖維細(xì)胞分離純化及原代培養(yǎng)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2012年06期

4 戴振聲,陳寶安,徐燕麗,黃培林,謝毅,謝弘;人皮膚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的改良[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年04期

5 林尊文;徐少宏;游敏;劉德伍;鐘世鎮(zhèn);;人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的改良培養(yǎng)和鑒定[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2011年24期

6 王文瑜;閆福華;姚麗艷;陳小玲;;人牙齦成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)及生長(zhǎng)曲線測(cè)定[J];海峽科學(xué);2007年08期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 楊瀾;趙清;韓知峽;邱志群;常曉松;陳濟(jì)安;許川;胡冉;舒為群;;轉(zhuǎn)染抗輻射菌recO基因?qū)ψ贤饩€所致皮膚成纖維細(xì)胞氧化及炎性損傷的保護(hù)作用[J];癌變.畸變.突變;2009年02期

2 汪薇;錢(qián)莉玲;劉海沛;孫波;;骨髓基質(zhì)細(xì)胞在脂多糖誘導(dǎo)的肺損傷小鼠肺組織的定植研究(英文)[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2009年05期

3 丁自強(qiáng),吳中立;肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)和磷脂酶A_2的損傷作用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1992年01期

4 羅玲;楊奕;徐洪;魏中秋;張麗娟;李倩;楊方;;PDGF介導(dǎo)的ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在大鼠矽肺纖維化形成中的作用[J];工業(yè)衛(wèi)生與職業(yè)病;2011年04期

5 孫金磊;董樂(lè)樂(lè);;降鈣素基因相關(guān)肽在創(chuàng)傷愈合中的作用及其對(duì)成纖維細(xì)胞的影響[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2012年06期

6 楊陸濤;劉美玲;張友來(lái);辛國(guó)華;李國(guó)輝;曾元臨;;亞硒酸鈉對(duì)人增生性瘢痕成纖維細(xì)胞體外增殖的影響[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年35期

7 陳偉;孫金磊;;降鈣素基因相關(guān)肽對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖的影響[J];淮海醫(yī)藥;2012年03期

8 鄧佳慧;肖軍花;王嘉陵;;成年小鼠肺成纖維細(xì)胞分離純化及原代培養(yǎng)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2012年06期

9 瓦龍美;肺泡Ⅱ型細(xì)胞的分離與純化[J];解剖學(xué)雜志;1998年02期

10 林泓磊;張長(zhǎng)源;鄭明;林東紅;程輝;;反復(fù)熔鑄鈷鉻烤瓷合金對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞的體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)[J];口腔醫(yī)學(xué)研究;2012年07期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 高圣堂;關(guān)于肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞參與肺間質(zhì)纖維化的探討[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1996年

2 劉丹;胰島素樣生長(zhǎng)因子系統(tǒng)在CLD中的作用及其機(jī)制的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2007年

3 劉淑華;以人毛囊外根鞘細(xì)胞和成纖維細(xì)胞構(gòu)建皮膚替代物的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2007年

4 孟曉梅;2型糖尿病患者血漿及其高密度脂蛋白對(duì)細(xì)胞內(nèi)膽固醇外流的影響&不同劑量雌激素對(duì)小鼠心臟和腎臟結(jié)構(gòu)和功能的影響[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

5 時(shí)輝寧;芥子氣皮膚損傷毒理學(xué)及對(duì)抗藥物研發(fā)策略應(yīng)用基礎(chǔ)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2009年

6 馬鈴;靜脈麻醉藥物對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的急性肺損傷大鼠肺組織CD14和TLR4受體的影響[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2009年

7 岳曉紅;高氧致CLD早產(chǎn)鼠p16基因啟動(dòng)子甲基化及其對(duì)肺纖維化作用的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2008年

8 胡章雪;Zonulin在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中的作用研究與甘氨鵝脫氧膽酸細(xì)胞毒性的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 王志強(qiáng);人孤雌胚胎干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為腸上皮干細(xì)胞的研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

10 宋寧憶;1、中國(guó)一先天性無(wú)虹膜癥家系臨床表型分析和PAX6基因突變檢測(cè) 2、人皮膚成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)、傳代、純化及鑒定[D];華中科技大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 邢蕾;新生豬肌組織成纖維細(xì)胞系和耳部皮膚成纖維細(xì)胞系的建立[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

2 黃俊;強(qiáng)脈沖光對(duì)成纖維細(xì)胞微核形成細(xì)胞增殖和膠原合成的影響[D];四川大學(xué);2007年

3 何斌;Gremlin對(duì)百草枯誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞膠原合成的影響[D];四川大學(xué);2007年

4 楊瀾;耐輻射奇球菌RecO、RecF原核與真核表達(dá)體系的構(gòu)建及抗紫外輻射損傷效應(yīng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

5 漆俊;血根堿對(duì)大鼠腸平滑肌細(xì)胞活性和細(xì)胞凋亡的影響[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

6 林泓磊;反復(fù)熔鑄對(duì)非鎳基烤瓷合金細(xì)胞毒性的影響及其機(jī)制的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

7 胡清泉;富硒溫泉水對(duì)增生性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的影響[D];南昌大學(xué);2012年

8 劉瑜瑜;微弧氧化水熱處理TLM鈦合金對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞生物學(xué)行為的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

9 陳劍鈺;齊墩果酸抗瘢痕增生作用及其分子機(jī)制研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2014年

10 余靜;小鼠胚胎成纖維細(xì)胞對(duì)體外培養(yǎng)肺泡上皮Ⅱ型細(xì)胞干性的維持作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 葛少華,楊丕山,戚向敏,孫欽峰;人牙周組織中三種細(xì)胞的培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)及增殖性研究[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2003年02期

2 黃錦桃;劉愛(ài)軍;侯春蓮;朱永紅;李海標(biāo);;胎鼠肺成纖維細(xì)胞的改良培養(yǎng)法[J];解剖學(xué)研究;2005年04期

3 戴振聲,陳寶安,徐燕麗,黃培林,謝毅,謝弘;人皮膚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的改良[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年04期

4 章伏生;陸樹(shù)良;;組織型轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶在皮膚增生性瘢痕中的作用[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2009年04期

5 余建軍;羅少軍;湯少明;張培華;;鴉膽子油靜脈乳劑對(duì)病理性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖與凋亡的影響[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2009年17期

6 祝華平,常立文,李文斌,劉漢楚,張謙慎;胎鼠肺細(xì)胞的分離純化及原代培養(yǎng)[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年06期

7 李衛(wèi)華,馮光珍,高春華,高輝;消化法人皮膚成纖維細(xì)胞系的建立[J];武警醫(yī)學(xué);1999年07期

8 寇全安,張涌,李裕強(qiáng),郭繼彤;兔成纖維細(xì)胞的分離與體外培養(yǎng)[J];西北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);1999年03期

9 林敏魁,閆福華,趙欣,駱凱;狗牙周膜成纖維細(xì)胞的體外培養(yǎng)及其生物學(xué)活性[J];中國(guó)臨床康復(fù);2004年08期

10 周結(jié)學(xué);劉東;鄭克立;鄧春華;文任乾;唐立新;馬春杰;;鼠胚成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)條件及滋養(yǎng)層制備[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年34期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 連敏;葉燕青;汪甜;劉冰;;新生大鼠肺成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)改良法及細(xì)胞鑒定[J];氨基酸和生物資源;2014年01期

2 趙克溫,苗俊英,張尚立,張捷,杜春青;人臍帶靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)及其凋亡的研究[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(理學(xué)版);2002年03期

3 陳興燦,嚴(yán)偉民,俞錦清,豐炳亮,鄭筱祥;動(dòng)物成骨細(xì)胞骨髓培養(yǎng)法的建立和鑒定[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2001年03期

4 ;[J];;年期

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 江波;勵(lì)精圖治 為生命喝彩[N];四川政協(xié)報(bào);2010年

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