發(fā)布時間：2017-08-07 00:23

  本文關(guān)鍵詞：細(xì)粒棘球蚴MAPKK樣激酶及其下游成員ERK和P38酵母雙雜交載體的構(gòu)建與自激活鑒定

  更多相關(guān)文章： 細(xì)粒棘球絳蟲 MAPK 酵母雙雜交 毒性 自激活

【摘要】：目的構(gòu)建細(xì)粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)絲裂原活化蛋白激酶激酶(EgMKK1)及其下游成員ERK、P38酵母雙雜交載體,并檢測融合蛋白對酵母菌生長的毒性作用及自激活活性。方法采集綿羊肝臟感染的Eg原頭蚴,生理鹽水沖洗5次,TRIzol法提取原頭蚴總RNA,取1μg RNA反轉(zhuǎn)錄cDNA。以cDNA為模板,PCR分別擴增EgMKK1、EgERK和EgP38基因片段,分別經(jīng)限制性內(nèi)切酶EcoRⅠ和BamHⅠ、EcoRⅠ和BamHⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ雙酶切,酶切片段連接至酵母雙雜交載體pGADT7或pGBKT7,經(jīng)酶切及測序鑒定正確后,應(yīng)用PEG/LiAc法將重組載體轉(zhuǎn)化入感受態(tài)酵母菌株Y2HGold,利用固體培養(yǎng)基篩選,檢測融合蛋白對酵母菌株生長的毒性作用及自激活活性。結(jié)果經(jīng)PCR擴增,分別獲得目的基因EgMKK1、EgERK和EgP38。構(gòu)建的重組酵母雙雜交載體pGADT7-EgMKK1、pGBKT7-EgERK及pGBKT7-EgP38經(jīng)雙酶切,分別得到1 017bp、1 086bp和1 107bp目的基因片段,大小與預(yù)測值相符。重組酵母雙雜交載體轉(zhuǎn)化Y2HGold酵母菌在SD/-Trp平板上形成直徑為1.5~2.0mm的菌落,與原始載體pGADT7或pGBKT7轉(zhuǎn)化酵母菌菌落大小一致;重組酵母雙雜交載體轉(zhuǎn)化酵母菌在SD/-Trp和SD/-Leu平板均有直徑約2mm白色菌落生長,而SDO/X/A和DDO/X/A固體培養(yǎng)基平板上無藍(lán)色菌落生長。結(jié)論成功構(gòu)建了酵母雙雜交載體pGADT7-EgMKK1、pGBKT7-EgERK和pGBKT7-EgP38,其表達(dá)蛋白對酵母菌Y2HGold無毒性和自激活作用,為進(jìn)一步研究EgMKK1與其下游成員EgERK、EgP38之間的相互作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院 新疆重大疾病醫(yī)學(xué)重點實驗室-省部共建國家重點實驗室培育基地 新疆包蟲病基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)粒棘球絳蟲 MAPK 酵母雙雜交 毒性 自激活
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.81101271,81260252) 長江學(xué)者和創(chuàng)新團(tuán)隊發(fā)展計劃項目(No.IRT1181) 新疆醫(yī)學(xué)動物模型研究重點實驗室開放課題(No.XJDX1103-2012-03)
【分類號】：R392
【正文快照】： 包蟲病(hidatidosis)是由棘球絳蟲的幼蟲寄生于人體及某些動物體內(nèi)所致的一種嚴(yán)重的人畜共患寄生蟲疾病[1]。該病成全球性分布,歐洲及南美洲等包蟲病多發(fā)地區(qū)主要以多房棘球蚴感染所致的泡型包蟲病多見,我國主要以細(xì)粒棘球蚴感染所致的囊型包蟲病多見,約占我國包蟲病人的97%[2

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 許隆祺;我國西部地區(qū)重大寄生蟲病的危害及對防治工作的反思[J];中國寄生蟲病防治雜志;2002年01期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 姚明琴,師茂林;1213例包蟲病住院病例的回顧性調(diào)查分析[J];地方病通報;2004年04期

2 阿依甫汗·阿汗;吐爾干艾力;邵英梅;溫浩;;肝包蟲病的外科治療現(xiàn)狀[J];肝膽外科雜志;2009年01期

3 唐群科;張瑛;李永壽;;肝泡球蚴病根治性切除11例術(shù)后調(diào)查[J];肝膽外科雜志;2010年05期

4 于琳琳;賈紅;侯紹華;劉丹;丁敏;郭曉宇;朱鴻飛;;羊C3d基因與細(xì)粒棘球蚴EG95s基因在桿狀病毒中的串聯(lián)表達(dá)[J];中國畜牧獸醫(yī);2010年11期

5 吳成果;蔣詩國;肖邦忠;羅興建;羅飛;李珊珊;;2001、2010年重慶市人群土源性線蟲感染流行趨勢調(diào)查[J];重慶醫(yī)學(xué);2012年20期

6 李作安;邵英梅;;肝囊型包蟲病囊腫破入腹腔診治進(jìn)展[J];中華實用診斷與治療雜志;2011年10期

7 夏洪芬;丁玉輝;李麗娟;;腹腔鏡下肝包蟲內(nèi)囊摘除術(shù)的手術(shù)配合[J];西南軍醫(yī);2010年03期

8 李群英;閆建文;郭建兵;普瓊;;西藏肝包蟲病47例報告[J];臨床肝膽病雜志;2011年07期

9 毛維君;;肝包蟲96例診治體會[J];甘肅科技縱橫;2011年01期

10 袁治;任海軍;吳小璐;潘亞文;丁永忠;張建生;裘明德;;重度腦囊蟲病服藥治療期間外科治療的必要性[J];蘭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馮運靈;楊炬;吳向林;李麗;;1991-2006年寧夏包蟲病住院病例回顧性調(diào)查分析[A];第二屆全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 單驕宇;細(xì)粒棘球蚴致樹突狀細(xì)胞免疫耐受的機制研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

2 丁劍冰;新疆細(xì)粒棘球蚴95抗原基因疫苗的免疫保護(hù)作用及其機制的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2003年

3 張琰;包蟲病所致免疫應(yīng)答及易感性的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2006年

4 馬秀敏;新疆細(xì)粒棘球絳蟲基因多態(tài)性及實驗診斷學(xué)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2007年

5 申紅;中國美利奴羊和多浪羊DRB1、DQB1基因多態(tài)性與包蟲病抗性關(guān)聯(lián)分析[D];石河子大學(xué);2008年

6 買合皮熱提汗·艾爾肯;泡狀棘球蚴感染誘導(dǎo)免疫耐受的實驗研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2012年

7 張靜;自制SAR協(xié)同HIFU殺滅細(xì)粒棘球蚴的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

8 王俊華;TGF-β與Th類細(xì)胞因子的“對話”在泡球蚴感染所致宿主病理損傷中的作用機制研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2014年

9 邰沁文;自體肝移植的臨床和相關(guān)實驗研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2013年

10 王瑩;細(xì)粒棘球絳蟲排泄分泌抗原免疫學(xué)特征及功能研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 岳進(jìn)巧;犬糞細(xì)粒棘球絳蟲PCR診斷試劑盒的研制[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2010年

2 王玉朝;帶科絳蟲8ku診斷抗原蛋白基因家族的研究[D];新疆農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 崔軍;肝囊型包蟲病與膽囊并發(fā)癥相關(guān)性因素的分析[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

4 克依木·居來提;190例肝囊型包蟲病術(shù)后并發(fā)癥臨床分析和處理[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2011年

5 溫青娜;哈薩克羊和中國美利奴羊DRB1基因SSCP多態(tài)性與細(xì)粒棘球蚴病遺傳抗性的關(guān)聯(lián)分析[D];石河子大學(xué);2010年

6 蔣松;阿苯達(dá)唑及其脂質(zhì)體治療綿羊肝包蟲病效果比較[D];石河子大學(xué);2009年

7 王有廣;細(xì)粒棘球蚴重組鐵蛋白和重組mMDH的免疫保護(hù)性差異機制的研究[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2011年

8 王松;繼發(fā)性細(xì)粒棘球蚴病小鼠的細(xì)胞因子動態(tài)研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2003年

9 侯巖巖;新疆不同地區(qū)利什曼原蟲抗原制備及應(yīng)用的研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2003年

10 單驕宇;絲裂霉素誘導(dǎo)原頭蚴體細(xì)胞凋亡的體外研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2005年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 柴君杰,葉爾江,魏明遠(yuǎn),常青,左新平,王革,焦偉,付承,孟賀巴持,李雄,張文林,楊旭,毛一丁,曹暉,石勁草,茹孜古麗,呂柏;新疆包蟲病流行病學(xué)基線的調(diào)查研究——I.人類包蟲病的血清流行病學(xué)調(diào)查[J];地方病通報;1989年04期

2 管立人,瞿靖琦,柴君杰;中國利什曼病的現(xiàn)狀和對開展防治工作的若干建議[J];地方病通報;2000年03期

3 齊普生;王進(jìn)成;張壯志;石保新;古努爾;吐爾洪;陳紹榮;黃燕;哈斯也提;;棘球蚴病在我國流行及防治[J];中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;1998年S2期

4 張斌,郭天金,莎仁,霍守梁,其其格,鈕莉春,單苒,劉清淮;內(nèi)蒙古自治區(qū)包蟲病流行病學(xué)調(diào)查[J];中國寄生蟲病防治雜志;1996年04期

5 許隆祺,蔣則孝,周長海,張雪強,任正軒,常江,許景田,李遠(yuǎn)璧,張莉莉,余森海,張廣源,馬成驥;我國囊尾蚴病分布情況調(diào)查[J];中國寄生蟲病防治雜志;1999年01期

6 葉爾江·蘇里唐,江莉,柴君杰;我國棘球蚴病防治研究進(jìn)展[J];中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志;2000年03期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 郜盡;王海俠;李京敬;俞雁;;酵母雙雜交報告基因β-半乳糖苷酶活性測定方法的研究[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2009年02期

2 江麗;蘭小鵬;;適體家族新成員——肽適體[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2009年02期

3 謝超;王方圓;袁運生;郜盡;朱潤芝;韓偉;俞雁;;酵母雙雜交研究小鼠肝臟再生TGF-β調(diào)控通路中相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的相互作用[J];上海交通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2011年05期

4 黃紅艷,李榮,孫強,王健,周鵬,韓驊,張萬會;LIM蛋白KyoT2與人類緊密連接蛋白2的相互作用[J];遺傳學(xué)報;2002年11期

5 王琪;張靜;田杰;張暉;;酵母雙雜交RRS篩選系統(tǒng)對已知蛋白間相互作用的驗證[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2008年02期

6 李劍敏,雷小勇,孫文清,張曉紅,唐圣松;用于酵母雙雜交的M-CSF誘餌載體的構(gòu)建和鑒定[J];南華大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年02期

7 陳桂生;李露撕;史樹貴;陳康寧;胡俊;吳軍;羅高興;袁順宗;彭旭;;家族性肌萎縮側(cè)索硬化癥研究中pGBKT7-mSOD1cDNA酵母雙雜交表達(dá)載體的構(gòu)建[J];寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2007年03期

8 房師松;何建凡;程小雯;劉濤;呂星;吳春利;王昕;張仁利;趙樹進(jìn);;聚合酶亞基間相互作用的抗流感病毒藥物篩選體系的建立[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2011年02期

9 梁衛(wèi)紅,唐朝榮,吳乃虎;兩種水稻GDP解離抑制蛋白基因的分離及特征分析[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2004年06期

10 鄧婧;王閣;楊進(jìn);鄭繼軍;王紅中;胡慶;王東;李增鵬;;Tec激酶區(qū)作用蛋白RAI16的篩選和結(jié)構(gòu)功能分析[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2006年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 李彥姝;;酵母雙雜交順轉(zhuǎn)法篩選相互作用蛋白質(zhì)[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第九次會員代表大會暨青年學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2007年

2 李彥姝;;PAK4相互作用蛋白質(zhì)篩選[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第九次會員代表大會暨青年學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2007年

3 李曄;李兆蕾;尚梅;吳銀娟;毛強;黃艷;賈飛飛;簡煜;李妍;單士超;余新炳;李學(xué)榮;;酵母雙雜交系統(tǒng)篩選人肝臟cDNA文庫中與肝吸蟲PLA2相互作用蛋白的基因序列[A];2013年全國寄生蟲學(xué)與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2013年

4 賈思遠(yuǎn);羅向東;齊潔;;酵母雙雜交證實Id1'與AGGF1存在相互作用[A];第八屆全國燒傷外科學(xué)年會論文匯編[C];2007年

5 張旭東;Rhonda R.McCartney;Tommy S.Tillman;Harry Solimeo;Stefan Wf;Ciprian Almonte;Simon C.Watkins;Martin C.Schmidt;;Stdl蛋白對葡萄糖感受體Rgt2和Snf3的作用及對蛋白激酶Snf1活性的調(diào)節(jié)(英文)[A];生命科學(xué)與生物技術(shù)：中國科協(xié)第三屆青年學(xué)術(shù)年會論文集[C];1998年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張勇;神經(jīng)營養(yǎng)因子受體下游信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的酵母雙雜交研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2002年

2 魯寧;應(yīng)用酵母雙雜交和酵母三雜交系統(tǒng)研究G蛋白信號傳導(dǎo)通路中的相關(guān)蛋白因子[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

3 車紅磊;NDRG2（371）相互作用分子篩選[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年

4 朱君俏;血管生成素與磷脂混雜酶1相互作用及其功能研究[D];浙江大學(xué);2009年

5 沈煜;子宮頸部位輸卵管蛋白表達(dá)和功能的初步研究及其在畢赤酵母的重組表達(dá)及純化[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

6 葉曉霞;人類新基因pp5644的功能研究以及酵母雙雜交載體的改造與文庫構(gòu)建[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

7 郭芬;小鼠Rhox5蛋白與鞘脂激活蛋白原功能性相互作用的研究[D];暨南大學(xué);2007年

8 袁莉剛;大鼠RSA14-44基因功能的初步研究[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

9 馬志海;G蛋白偶聯(lián)受體激酶的新底物Eps15的發(fā)現(xiàn)及其生物學(xué)功能研究[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

10 孫茂云;Cyclin D3相關(guān)蛋白的篩選及其與ERK3或nm23-H2相互作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周愛娜;酵母雙雜交法篩選與BACE蛋白有相互作用的蛋白[D];廈門大學(xué);2006年

2 沈宏杰;人多肽：N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶2結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系的初步研究[D];蘇州大學(xué);2006年

3 陳瓊瓊;酵母雙雜交法對STK11羧基端互作蛋白的篩選[D];中南大學(xué);2010年

4 黃欣媛;Daintain/AIF-1酵母雙雜交誘餌表達(dá)載體的構(gòu)建及初步鑒定[D];華中科技大學(xué);2007年

5 宋博翠;利用酵母雙雜交方法從小鼠腦cDNA文庫中篩選朊蛋白的互作蛋白[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2010年

6 劉康武;PRAS40與14-3-3蛋白的分離純化及相互作用規(guī)律的酵母雙雜交檢測[D];安徽大學(xué);2007年

7 羅星;Neuritin的組織表達(dá)分析及其相互作用因子的篩選[D];石河子大學(xué);2005年

8 王永虎;利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選家蠶BR-C轉(zhuǎn)錄因子的相互作用蛋白[D];西南大學(xué);2013年

9 徐玉金;FoxP3與UXT相互作用位點的確認(rèn)及其相互作用的生物學(xué)功能研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

10 霍淑芳;酵母雙雜交法篩選與PS1-C_（265-467）有相互作用的蛋白[D];廈門大學(xué);2006年

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本文編號：632122