發(fā)布時(shí)間：2017-08-04 18:18

  本文關(guān)鍵詞：不同階段泡沫細(xì)胞模型的建立與鑒定

  更多相關(guān)文章： 氧化型低密度脂蛋白 THP-細(xì)胞 泡沫細(xì)胞 動(dòng)脈粥樣硬化

【摘要】：目的建立不同階段的泡沫細(xì)胞,并對(duì)其生物特性進(jìn)行鑒定。方法體外培養(yǎng)人THP-1來源的巨噬細(xì)胞(THP-M),由ox-LDL誘導(dǎo)其轉(zhuǎn)化為不同階段泡沫細(xì)胞,ELISA方法檢測不同階段泡沫細(xì)胞內(nèi)總膽固醇和膽固醇酯含量;透射電鏡和油紅O染色光鏡觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì),噻唑藍(lán)染色法測定不同階段泡沫細(xì)胞的活性變化規(guī)律。Western blot方法測定II型微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(LC3II)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 24h開始,THP-M細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量的紅染顆粒或脂質(zhì)空泡,總膽固醇和膽固醇酯均較對(duì)照組增加,細(xì)胞膽固醇酯含量大于總膽固醇的50%,泡沫細(xì)胞已經(jīng)形成。噻唑藍(lán)染色結(jié)果顯示,自48h開始少量泡沫細(xì)胞出現(xiàn)死亡現(xiàn)象(存活率93.21±3.66%),60h和72h細(xì)胞存活率率分別為72.15±2.23%和63.06±1.83%。電鏡掃描結(jié)果發(fā)現(xiàn),24h細(xì)胞內(nèi)脂滴聚集,24h內(nèi)細(xì)胞漿自噬小體逐漸增多。36h、48h細(xì)胞內(nèi)脂滴大小和形態(tài)各異,可見吞噬脂滴后尚未消化完全的自噬溶酶體,部分細(xì)胞膜破裂;60h和72h,細(xì)胞內(nèi)自噬小體數(shù)量明顯減少,細(xì)胞大量崩解。Western blot檢測結(jié)果表明自噬標(biāo)志性蛋白LC3II表達(dá)水平變化規(guī)律與電鏡觀察自噬小體結(jié)果一致。結(jié)論利用oxLDL誘導(dǎo)THP-M24h、36h-48h、60h-72h后,細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞內(nèi)脂含量分別符合早期、中期和晚期泡沫細(xì)胞的生物特征,成功建立了早、中、晚期泡沫細(xì)胞模型,其中細(xì)胞活力變化可能與II型凋亡(自噬性死亡)相關(guān)。為不同病程AS研究提供支持。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院國家心血管病中心阜外心血管病醫(yī)院心血管疾病國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室北京市心血管植入材料臨床前評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心;
【關(guān)鍵詞】： 氧化型低密度脂蛋白 THP-細(xì)胞 泡沫細(xì)胞 動(dòng)脈粥樣硬化
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81200213)
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)是貫穿心腦血管疾病的主線,是心肌梗死和腦卒中兩大主要心腦血管疾病的最根本原因。泡沫細(xì)胞在AS發(fā)生與發(fā)展中扮演重要角色[1-3]。建立穩(wěn)定可靠的泡沫細(xì)胞模型[4,5],對(duì)研究AS分子機(jī)制及篩選抗AS藥物有重要的意義。但總結(jié)多篇利用泡沫細(xì)胞模型

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李厚軒;雷浪;閆福華;;氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)泡沫細(xì)胞形成過程中細(xì)胞因子水平的變化[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2010年08期

2 陳科;程漢華;周榮家;;自噬與泛素化蛋白降解途徑的分子機(jī)制及其功能[J];遺傳;2012年01期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄒志鵬;李煜生;陳娟;姜勇;;親和磷酸蛋白組學(xué)——篩選LPS信號(hào)通路中調(diào)節(jié)蛋白的新方法[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年06期

2 劉斌;唐靜;袁敏;李世英;;血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)自噬及微管相關(guān)蛋白1輕鏈3的表達(dá)[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年09期

3 呂杰;李柏青;劉勇;馬麗娜;劉婷婷;劉叢森;;幽門螺桿菌對(duì)胃黏膜上皮細(xì)胞自噬和凋亡的影響[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年06期

4 劉斌;唐靜;袁敏;畢樹立;李世英;;自噬在血管性癡呆發(fā)病中的作用研究[J];臨床神經(jīng)病學(xué)雜志;2013年06期

5 高典;隗黎麗;許珍娥;劉申;喬盼盼;;荷包紅鯉自噬相關(guān)基因LC3B的克隆及在重金屬鎘脅迫下的表達(dá)[J];南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(理科版);2013年06期

6 翟純剛;季曉平;王和峰;程晶;張運(yùn);陳文強(qiáng);;抑制PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路對(duì)兔原代巨噬細(xì)胞自體吞噬的影響及機(jī)制[J];中國動(dòng)脈硬化雜志;2014年01期

7 趙凱;陳文強(qiáng);徐興晟;孟曉;張運(yùn);李繼福;;單核細(xì)胞自體吞噬相關(guān)基因蛋白表達(dá)與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊易損性的關(guān)系[J];中國動(dòng)脈硬化雜志;2014年01期

8 趙疆東;王永春;石菲;詹皓;孫喜慶;;正加速度暴露后大鼠心室肌LC3發(fā)生高表達(dá)變化[J];解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年04期

9 陳蘭芳;肖亮;楊軍平;;細(xì)胞自噬的分子機(jī)制及其功能[J];實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2014年02期

10 黃麗瓊;黃貴華;紀(jì)云西;林華勝;周衡;曾飛劍;余九峰;劉莉;蒙紅華;;細(xì)胞自噬與中醫(yī)“陰陽”及“氣”理論相關(guān)性探討[J];遼寧中醫(yī)雜志;2014年06期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 祝學(xué)衛(wèi);載脂蛋白A-Ⅰ（apolipoprotein A-Ⅰ）及其半胱氨酸突變體結(jié)構(gòu)和功能研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

2 劉澤虎;白念珠菌形態(tài)、胞壁多糖的結(jié)構(gòu)及其免疫學(xué)活性的相關(guān)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

3 梅春麗;肺炎衣原體誘導(dǎo)THP-1源性泡沫細(xì)胞形成的機(jī)制[D];華中科技大學(xué);2009年

4 劉瑋;肺炎衣原體誘導(dǎo)THP-1源性巨噬細(xì)胞膽固醇代謝穩(wěn)態(tài)失衡的信號(hào)機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2010年

5 楊愛民;Neuronostatin對(duì)痛覺、胃腸運(yùn)動(dòng)和情緒的影響及脂基化蛋白LC3-Ⅱ的半合成[D];蘭州大學(xué);2013年

6 王振波;LC3A在食管鱗癌中的放化療敏感性預(yù)測作用[D];山東大學(xué);2013年

7 耿靜;束縛應(yīng)激加重?cái)D壓傷大鼠腎損傷的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

8 張浩然;抑制自噬對(duì)骨髓瘤細(xì)胞藥物干預(yù)敏感性及DEPTOR在調(diào)節(jié)自噬和凋亡中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

9 傅麒寧;自噬現(xiàn)象與乙肝病毒復(fù)制的關(guān)系[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

10 朱永健;ARHI基因與自噬在胰腺癌中的作用及相關(guān)機(jī)制的初探[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳南鵬;腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞的定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D];暨南大學(xué);2011年

2 焦珍珍;oxLDL對(duì)正常人外周血單個(gè)核細(xì)胞LOX-1及uPAR表達(dá)的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

3 閻淑;IL-17在Con A誘導(dǎo)的自身免疫性肝損傷中的作用及其機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

4 文雯;Thp-1細(xì)胞內(nèi)PPARα基因沉默對(duì)C.pn誘導(dǎo)Thp-1源性泡沫細(xì)胞形成的影響[D];華中科技大學(xué);2011年

5 郭小芳;去甲腎上腺素誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞差異表達(dá)上調(diào)基因cDNA文庫的構(gòu)建[D];南華大學(xué);2006年

6 肖榮;去甲腎上腺素對(duì)外周細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響[D];南華大學(xué);2007年

7 馮同勝;缺氧對(duì)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞生物學(xué)特征的影響[D];蘇州大學(xué);2012年

8 張曉紅;缺血預(yù)處理對(duì)大鼠腎缺血—再灌注損傷保護(hù)作用中自噬及凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)及其意義[D];蘇州大學(xué);2012年

9 張瑩;轉(zhuǎn)錄因子ZmPTF1調(diào)控基因的鑒定及表達(dá)分析[D];山東大學(xué);2012年

10 尚斌;抑制自噬對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞促進(jìn)靜脈血栓機(jī)化再通的影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2013年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 Michael A.Maldonado;;The Ubiquitin-Proteasome System and Its Role in Inflammatory and Autoimmune Diseases[J];Cellular & Molecular Immunology;2006年04期

2 章晟;于長明;殷瑛;陳薇;;細(xì)胞自噬在病原體感染過程中的作用研究進(jìn)展[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2009年05期

3 林芳,顧振綸,秦正紅;自噬及其在細(xì)胞代謝和疾病中的作用[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2005年04期

4 李艷鳳;張強(qiáng);朱大海;;泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)降解與腫瘤發(fā)生[J];遺傳;2006年12期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 徐增綬,鄧仲端,李麗珠,王燕麗,邱紅明;家鴿實(shí)驗(yàn)性主動(dòng)脈粥樣硬化的病理形態(tài)學(xué)研究[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);1987年01期

2 馮翔,凌文華;氧化低密度脂蛋白及溶血卵磷脂對(duì)巨噬泡沫細(xì)胞膽固醇外流的影響[J];中國病理生理雜志;2003年09期

3 汪俊軍,李雯,劉戀,周毓,張春妮,范樂明;氧化低密度脂蛋白循環(huán)免疫復(fù)合物誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞膽固醇酯蓄積[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2005年03期

4 吳鵬;劉映峰;梁東輝;陳允欽;繆緋;劉永源;;人單核源性泡沫細(xì)胞疾病模型的建立[J];中國老年學(xué)雜志;2008年12期

5 宋越;李航;張麗英;葉菁;李青;;脂肪分化相關(guān)蛋白在巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞中的表達(dá)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2009年04期

6 王彥富;成蓓;萬晶晶;梅春麗;劉瑋;柯麗;何平;;Ghrelin對(duì)THP-1細(xì)胞泡沫化過程中酰基輔酶A:膽固醇�；D(zhuǎn)移酶1表達(dá)的影響[J];中國病理生理雜志;2009年09期

7 邱紅明,鄧仲端;血源性單核巨噬細(xì)胞在兔動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生中的作用[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);1990年02期

8 黃肖耆;泡沫細(xì)胞的形態(tài)學(xué)鑒別[J];臨床檢驗(yàn)雜志;1994年01期

9 ;動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中泡沫細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);1985年05期

10 宋武,蔡海江;巨噬細(xì)胞乙酰LDL受體的研究[J];中國病理生理雜志;1988年02期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 魯艷軍;田俊;狄勇;孫自鏞;;富含甘油三酯的泡沫細(xì)胞的雙向熒光差異凝膠電泳[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第九次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中國醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)第六屆全國臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

2 丁帆;程秀麗;閆莉;谷婧麗;郝維;高雪;曹濟(jì)民;;Hexarelin通過下調(diào)LOX-1的表達(dá)抑制巨噬細(xì)胞向泡沫細(xì)胞轉(zhuǎn)化[A];第八屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2011年

3 茍連平;呂湛;秦儉;高電薩;;ApoA-Ⅰ對(duì)巨噬細(xì)胞分化成泡沫細(xì)胞過程中TNFα、IL-6的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第12次全國內(nèi)科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

4 岳兵;陳志堅(jiān);王彥富;彭紅玉;梅春麗;肖華;祝聰聰;;核因子-κB在血管緊張素Ⅱ介導(dǎo)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞膽固醇流出及ABCA1表達(dá)調(diào)控過程中的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第11次心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2009年

5 唐朝克;郝新瑞;曹冬黎;胡炎偉;李曉旭;肖繼;劉協(xié)紅;莫中成;;干擾素γ通過JAK-STAT1途徑抑制細(xì)胞ABCA1的表達(dá)及膽固醇流[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2008年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

6 劉尚喜;;巨噬細(xì)胞參與泡沫細(xì)胞形成的機(jī)理[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)暨第二屆全國中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議專題講座匯編[C];2004年

7 吳凡;屈伸;;oxLDL及炎性因子對(duì)ABCA1功能和表達(dá)的影響及相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的探討[A];湖北省暨武漢生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)和第十五次學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

8 宋越;李航;張麗英;葉菁;李青;;脂肪分化相關(guān)蛋白在巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞中的表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

9 廖端芳;;小凹蛋白-1與細(xì)胞膽固醇運(yùn)動(dòng)[A];第七屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會(huì)論文集[C];2009年

10 鐘武;關(guān)霞;龍漢安;何延政;楊輝;李國英;;球囊損傷加高脂喂養(yǎng)建立大鼠髂動(dòng)脈粥樣硬化模型[A];2008年中國解剖學(xué)會(huì)第十一屆教學(xué)改革研討會(huì)論文集[C];2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 鄧同樂;Ox-LDL誘導(dǎo)早期巨噬細(xì)胞源泡沫細(xì)胞形成和損傷中相關(guān)動(dòng)力學(xué)機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2006年

2 管曉翔;A類清道夫受體胞漿域功能特性的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2003年

3 趙戰(zhàn)芝;硫化氫對(duì)巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞形成和動(dòng)脈粥樣硬化斑塊脂質(zhì)蓄積的影響[D];南華大學(xué);2011年

4 葉強(qiáng);炎癥引起膽固醇敏感器SCAP功能失調(diào)致泡沫細(xì)胞形成的分子機(jī)制[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

5 吳欽欽;NF-κB信號(hào)通路在肺炎衣原體誘導(dǎo)THP-1源性巨噬細(xì)胞膽固醇代謝失衡中的作用[D];華中科技大學(xué);2013年

6 張文清;犬嫁接性梭形動(dòng)脈瘤轉(zhuǎn)移性生物膜包裹治療的實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2007年

7 孫莉;動(dòng)脈硬化相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)[D];天津醫(yī)科大學(xué);2002年

8 金偉權(quán);尿激酶型纖溶酶原激活物受體（uPAR）與動(dòng)脈粥樣硬化之間的相關(guān)性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2009年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 閻豐;血管緊張素-（1-7）對(duì)THP-1源性泡沫細(xì)胞膽固醇外流的影響及機(jī)制探討[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

2 劉娟;血管緊張素（1-7）通過ERK1/2、NF-κB信號(hào)通路對(duì)泡沫細(xì)胞形成的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

3 賈俊琴;ADMA對(duì)人THP-1源巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量影響的研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2010年

4 任澤鵬;IL-37對(duì)THP-1源巨噬細(xì)胞泡沫化的影響[D];華中科技大學(xué);2013年

5 王曉花;A類清道夫受體胞漿域結(jié)合肽的篩選與功能鑒定[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

6 王夢;血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體1對(duì)THP-1單核巨噬細(xì)胞源泡沫細(xì)胞MMP-9表達(dá)的影響及辛伐他汀的干預(yù)作用[D];山東大學(xué);2008年

7 蔣海露;白細(xì)胞介素18下調(diào)泡沫細(xì)胞ABCA1的表達(dá)及其機(jī)制[D];南華大學(xué);2011年

8 戴學(xué)棟;ApoE/LDLR雙基因缺失小鼠炎癥相關(guān)基因的表達(dá)研究[D];山東師范大學(xué);2008年

9 孫定軍;MPO對(duì)THP-1細(xì)胞泡沫化的影響和相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];中南大學(xué);2008年

10 劉清南;Adipophilin通過ERK1/2-PPARγ途徑促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積[D];南華大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：621010