本文關(guān)鍵詞：人RACK1蛋白在HEK-293T和BL21細(xì)胞中的表達(dá)及COS7細(xì)胞的定位

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【摘要】：目的構(gòu)建可以表達(dá)有活性的蛋白激酶C受體(RACK1)的重組質(zhì)粒,檢測(cè)其在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)與定位情況。方法設(shè)計(jì)上下游引物,以RACK1全長cDNA序列為模板,PCR擴(kuò)增出RACK1序列,分別構(gòu)建到載體pcDNA3.1和pGEX-5X-3。轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-FLAG-RACK1到人胚胎腎細(xì)胞(HEK-293T)和非洲綠猴腎成纖維細(xì)胞(COS7細(xì)胞),轉(zhuǎn)化pGEX-5X-3-RACK1到大腸桿菌BL21感受態(tài)細(xì)胞中表達(dá),Western blot法和考馬斯亮藍(lán)染色法檢測(cè)RACK1表達(dá)情況,免疫熒光法研究其細(xì)胞內(nèi)定位。結(jié)果成功構(gòu)建了pcDNA3.1-FLAG-RACK1和GEX-5X-3-RACK1重組質(zhì)粒。Western blot證明了其在HEK-293T細(xì)胞中的表達(dá),考馬斯亮藍(lán)染色顯示其在BL21菌株也能大量表達(dá),免疫熒光顯示RACK1在COS7的細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中均有分布。結(jié)論人RACK1在HEK-293T細(xì)胞和BL21菌株中均能有效表達(dá),在COS7細(xì)胞的胞質(zhì)、胞核均有分布,為進(jìn)一步研究人RACK1基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)生命科學(xué)院生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： RACK 基因表達(dá) 細(xì)胞定位 BL
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年基金(編號(hào):81201368) 安徽省自然科學(xué)基金(編號(hào):11040606M170、11040606M164) 安徽省教育廳自然科學(xué)重點(diǎn)科研項(xiàng)目(編號(hào):KJ2010A187)
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 有活性的蛋白激酶C受體(repector for activatedC kinase,RACK1)是一種分子量為36 ku的G蛋白β亞單位的同源物,是WD-40蛋白家族中的一個(gè)成員。編碼基因定位于5q35.3,是RACKS家族中第一個(gè)被識(shí)別的成員[1],并且RACK1蛋白從衣藻到人類都是保守的。后來因?yàn)槠浣Y(jié)構(gòu)與哺乳動(dòng)物G蛋白

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本文編號(hào)：599450