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TMEM16A和TMEM16B在CCI模型鼠DRG神經(jīng)元上的表達(dá)

發(fā)布時(shí)間:2017-07-31 10:01

  本文關(guān)鍵詞:TMEM16A和TMEM16B在CCI模型鼠DRG神經(jīng)元上的表達(dá)


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【摘要】:目的:比較正常大鼠、坐骨神經(jīng)壓榨性損傷(Chronic Constriction Injury,CCI)模型鼠及不同濃度尼氟滅酸(Niflumic Acid,NFA)干預(yù)后的CCI模型鼠的熱縮足反射潛伏期(Thermal Withdrawal Latency,TWL)的改變,及各組大鼠DRG神經(jīng)元上TMEM16A和TMEM16B的m RNA水平和蛋白表達(dá)的改變,旨在探討鈣激活氯通道(calcium-ctivated chloride channels,Ca CCs)在神經(jīng)病理性痛(Neuropathic pain,NPP)中的調(diào)節(jié)作用。方法:制作CCI模型;運(yùn)用熱板實(shí)驗(yàn)分別在術(shù)前1 d,術(shù)后第1、3、5、7、9、12、14d檢測(cè)正常大鼠、CCI模型鼠及10μM、50μM和300μM的NFA干預(yù)后的CCI模型鼠的TWL;運(yùn)用免疫熒光實(shí)驗(yàn)技術(shù)檢測(cè)TMEM16A和TMEM16B在正常大鼠DRG上的分布;運(yùn)用RT-PCR技術(shù)和Western Blot技術(shù)分別檢測(cè)各組大鼠的DRG神經(jīng)元上,TMEM16A和TMEM16B的m RNA水平和蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)CCI模型鼠較正常大鼠TWL明顯縮短(P0.01,n=6),給予10μM、50μM和300μM的NFA干預(yù)后與CCI組相比TWL均明顯延長(zhǎng)(P0.01,n=6),其中50μM的NFA干預(yù)組較10μM的NFA干預(yù)組的TWL也明顯延長(zhǎng)(P0.01,n=6),但300μM的NFA干預(yù)組和50μM的NFA干預(yù)組之間的TWL無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(2)免疫熒光顯示在正常大鼠DRG中,TMEM16A和TMEM16B主要表達(dá)在DRG神經(jīng)元上。(3)運(yùn)用RT-PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)CCI模型鼠較正常大鼠DRG神經(jīng)元上的TMEM16A的m RNA水平明顯上調(diào)(P0.01,n=6),CCI模型鼠給予NFA干預(yù)后DRG神經(jīng)元上的TMEM16A的m RNA水平顯著下調(diào)(P0.01,n=6),隨著NFA干預(yù)濃度的增加,TMEM16A的m RNA水平呈濃度依賴(lài)性的下調(diào)(P0.01,n=6);CCI模型鼠DRG神經(jīng)元上的TMEM16B的m RNA水平明顯下調(diào);給予NFA干預(yù)后TMEM16B的m RNA水平顯著上調(diào)(P0.01,n=6),隨著NFA干預(yù)濃度的增加,TMEM16B的m RNA水平呈濃度依賴(lài)性的上調(diào)(P0.01,n=6)。(4)運(yùn)用Western Blot技術(shù)發(fā)現(xiàn)CCI模型鼠與正常大鼠相比,DRG神經(jīng)元上的TMEM16A的表達(dá)明顯上調(diào)(P0.01,n=6),CCI模型給予NFA干預(yù)后,DRG神經(jīng)元上的TMEM16A的表達(dá)明顯下調(diào)(P0.01,n=6),隨著NFA干預(yù)濃度的增加,TMEM16A的表達(dá)呈濃度依賴(lài)性的下調(diào)(P0.01,n=6);CCI模型鼠DRG神經(jīng)元上的TMEM16B的表達(dá)明顯下調(diào);給予NFA后,TMEM16B的表達(dá)顯著上調(diào)(P0.01,n=6),隨著NFA干預(yù)濃度的增加,TMEM16B的表達(dá)呈濃度依賴(lài)性的上調(diào)(P0.01,n=6)。結(jié)論:NFA干預(yù)后CCI模型鼠DRG神經(jīng)元上的TMEM16A和TMEM16B在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平均發(fā)生改變,提示TMEM16A和TMEM16B可能共同參與了神經(jīng)病理性痛的產(chǎn)生。
【關(guān)鍵詞】:鈣激活氯通道 TMEM16A TMEM16B NFA DRG
【學(xué)位授予單位】:石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2015
【分類(lèi)號(hào)】:R741;R-332
【目錄】:
  • 摘要5-6
  • Abstract6-8
  • 英文縮略語(yǔ)表8-9
  • 前言9-12
  • 材料和方法12-25
  • 1 材料12-17
  • 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組12
  • 1.2 主要實(shí)驗(yàn)儀器12-14
  • 1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑、耗材14-15
  • 1.4 主要實(shí)驗(yàn)液體配置15-17
  • 2 方法17-25
  • 2.1 CCI動(dòng)物模型制作方法17
  • 2.2 NFA干預(yù)CCI模型的制備17
  • 2.3 熱板實(shí)驗(yàn)及行為學(xué)觀察17-18
  • 2.4 DRG神經(jīng)元制備基本方法18
  • 2.5 免疫熒光染色18-19
  • 2.6 蛋白提取的基本方法19-20
  • 2.7 Western Blot實(shí)驗(yàn)基本步驟20-23
  • 2.8 RT-PCR實(shí)驗(yàn)基本步驟23-24
  • 2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法24-25
  • 結(jié)果25-31
  • 1 痛行為學(xué)檢測(cè)25-26
  • 1.1 模型大鼠足部狀態(tài)及行為學(xué)觀測(cè)25
  • 1.2 熱縮足反射潛伏期25-26
  • 2 免疫熒光試驗(yàn)結(jié)果26-27
  • 3 RT-PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-29
  • 4 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-31
  • 討論31-34
  • 結(jié)論和展望34-35
  • 1 結(jié)論34
  • 2 展望34-35
  • 參考文獻(xiàn)35-39
  • 文獻(xiàn)綜述39-46
  • 參考文獻(xiàn)43-46
  • 致謝46-47
  • 作者簡(jiǎn)介47-48
  • 附頁(yè)48

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本文編號(hào):598564

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