本文關(guān)鍵詞：NogoB-shRNA表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其在大鼠原代肝星狀細(xì)胞收縮中的作用

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【摘要】：目的構(gòu)建針對大鼠NogoB基因的shRNA表達(dá)質(zhì)粒,并初步探究其在大鼠肝星狀細(xì)胞(HSCs)收縮功能中的作用。方法設(shè)計(jì)并合成針對大鼠NogoB基因3個不同位點(diǎn)的shRNA,通過DNA重組技術(shù),將shRNA插入pSuper質(zhì)粒中,構(gòu)建NogoB-shRNA重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染至大鼠原代肝星狀細(xì)胞(HSCs)中,并通過Realtime PCR技術(shù)檢測基因的相對表達(dá)量,篩選出能沉默大鼠NogoB基因的重組質(zhì)粒,再通過Western blot加以驗(yàn)證,同時(shí)觀察NogoB基因被抑制后,HSCs中內(nèi)皮素1(Endothelin-1,ET-1)受體A、受體B(ETA、ETB)表達(dá)水平的變化。結(jié)果構(gòu)建的3對重組質(zhì)粒中,NogoB-shRNA2對NogoB的基因的表達(dá)具有明顯的抑制作用。NogoB基因被抑制后,大鼠HSCs中ETA的表達(dá)無明顯變化,ETB的表達(dá)升高,ETA/ETB的水平降低。結(jié)論成功構(gòu)建了有效、特異的抑制大鼠NogoB基因表達(dá)的shRNA表達(dá)質(zhì)粒,并初步觀察到NogoB在肝星狀細(xì)胞的收縮中可能有一定作用。
【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院消化內(nèi)科;四川大學(xué)華西醫(yī)院再生醫(yī)學(xué)研究中心心血管疾病研究室;
【關(guān)鍵詞】： 短發(fā)夾RNA NogoB 肝星狀細(xì)胞
【基金】：四川省科技廳項(xiàng)目(No.2013FZ0085) 四川省成都市科技廳項(xiàng)目(No.13PPYB994SF-014)資助
【分類號】：R346
【正文快照】： NogoB蛋白是主要位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的一組跨膜功能蛋白,它廣泛分布于神經(jīng)系統(tǒng)、心血管、肺、腎臟、肝臟等各種組織中,與腫瘤抑制、凋亡、血管重塑、損傷修復(fù)等密切相關(guān)[1 3]。肝星狀細(xì)胞(HSCs)活化后具有增殖、分泌細(xì)胞外基質(zhì)及血管平滑肌樣的收縮功能,是引起肝竇阻力增加,從而導(dǎo)致

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5 秦h覬，

本文編號：596408