發(fā)布時(shí)間：2017-07-21 04:16

  本文關(guān)鍵詞：補(bǔ)腎生髓法聯(lián)合BMSCs移植對D-半乳糖致衰老大鼠CyclinD、CDK4及pRb磷酸化狀態(tài)的影響

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【摘要】：目的:研究補(bǔ)腎生髓方聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植對D-半乳糖致衰老大鼠周期蛋白D(CyclinD)、周期蛋白依賴性蛋白激酶4(Cyclin-dependent protein kinases,CDK4)、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(Retinoblastoma,Rb)基因表達(dá)產(chǎn)物-pRb磷酸化狀態(tài)的影響,初步探討補(bǔ)腎生髓法聯(lián)合BMSCs移植延緩衰老的作用及機(jī)制。方法:(1)大鼠頸背部皮下注射10%D-半乳糖制備亞急性衰老模型,通過與自然衰老大鼠組、青年大鼠組比較老化度評分、測定大鼠血清超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醇(Malondialdehyde malonic dialdehyde propanedial,MDA)含量評判大鼠衰老模型制備成功與否。(2)采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁分離篩選法體外培養(yǎng)BMSCs。(3)亞急性衰老模型大鼠隨機(jī)分為四組:甲組(模型組)、乙組(補(bǔ)腎生髓方組)、丙組(補(bǔ)腎生髓方+BMSCs移植組)、丁組(BMSCs移植組),各組進(jìn)行相應(yīng)干預(yù)后,比較各組老化度評分,取大鼠血清測定SOD活性和MDA含量,取大鼠海馬組織采用免疫組化法檢測CyclinD、CDK4及pRb磷酸化表達(dá)狀態(tài)。結(jié)果:(1)亞急性衰老模型大鼠老化度評分均上升,SOD活性顯著降低,MDA含量均升高,與自然衰老大鼠組對比組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與青年大鼠組比較組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),亞急性衰老模型制備成功。(2)通過形態(tài)學(xué)觀察,原代培養(yǎng)的BMSCs貼壁生長,單個(gè)呈長梭形或多角形,集落分布,P3、P4、P5 BMSCs生長曲線均近似“S”形,流式細(xì)胞儀檢測P3 BMSCs表面標(biāo)記物CD71、CD44陽性率均達(dá)到95%以上,傳代培養(yǎng)細(xì)胞符合實(shí)驗(yàn)要求。(3)亞急性衰老模型大鼠進(jìn)行不同干預(yù)后,四組老化度評分、SOD活性、MDA含量及CyclinD、CDK4、pRb磷酸化狀態(tài)的陽性表達(dá)率結(jié)果比較,組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);組間兩兩比較,與甲組比較,乙組、丙組、丁組老化度評分均有所下降,SOD活性均有上升,MDA含量下降,CyclinD、CDK4、pRb磷酸化狀態(tài)的陽性表達(dá)率均上升,組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);乙、丙、丁三組間比較,組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其中丙組的老化度評分下降、SOD活性上升、MDA含量下降程度最明顯,CyclinD、CDK4、pRb磷酸化狀態(tài)的陽性表達(dá)率分別達(dá)90%、90%、80%。結(jié)論:補(bǔ)腎生髓法聯(lián)合BMSCs移植能有效地延緩衰老,其可能通過影響CyclinD-CDK4-pRb細(xì)胞通路的傳導(dǎo)與調(diào)控發(fā)揮作用。
【關(guān)鍵詞】：補(bǔ)腎生髓方 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植 D-半乳糖 延緩衰老 周期蛋白D 周期蛋白依賴性蛋白激酶4 視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因表達(dá)產(chǎn)物pRb磷酸化狀態(tài)
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R339.38
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 引言10-12
• 第一部分 實(shí)驗(yàn)材料12-14
• 1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物12
• 1.2 實(shí)驗(yàn)藥物12
• 1.3 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞12
• 1.4 實(shí)驗(yàn)試劑12-13
• 1.5 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備13-14
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)方法14-18
• 2.1 衰老大鼠模型的制備14
• 2.2 大鼠BMSCs的提取、傳代培養(yǎng)及觀察、鑒定14-15
• 2.2.1 大鼠BMSCs的提取14
• 2.2.2 大鼠BMSCs的傳代與培養(yǎng)14-15
• 2.2.3 大鼠BMSCs的細(xì)胞生長曲線的繪制15
• 2.2.4 流式細(xì)胞儀檢測BMSCs表面標(biāo)記物15
• 2.3 實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)因素15-16
• 2.4 檢測指標(biāo)及方法16-17
• 2.4.1 老化度評分表16
• 2.4.2 大鼠血清SOD活性與MDA含量16
• 2.4.3 大鼠海馬CyclinD、CDK4、pRb磷酸化狀態(tài)檢測16-17
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理17-18
• 第三部分 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析18-25
• 3.1 老化度評分結(jié)果18-19
• 3.2 大鼠BMSCs的觀察及鑒定19-20
• 3.2.1 大鼠BMSCs的形態(tài)學(xué)特征19-20
• 3.2.2 大鼠BMSCs的細(xì)胞生長曲線20
• 3.2.3 大鼠BMSCs的表面標(biāo)記物20
• 3.3 大鼠血清SOD活性及MDA含量20-22
• 3.4 大鼠海馬CyclinD、CDK4、pRb磷酸化狀態(tài)22-25
• 3.4.1 大鼠海馬Cyclin D的表達(dá)狀態(tài)22
• 3.4.2 大鼠海馬CDK4的表達(dá)狀態(tài)22-23
• 3.4.3 大鼠海馬pRb磷酸化表達(dá)狀態(tài)23-25
• 第四部分 討論25-32
• 4.1 補(bǔ)腎生髓法延緩衰老的理論依據(jù)25
• 4.2 補(bǔ)腎生髓方的組方依據(jù)25-26
• 4.3 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對于衰老的認(rèn)識26
• 4.4 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞延緩衰老的理論依據(jù)26-28
• 4.5 大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的移植28
• 4.6 D-半乳糖致大鼠衰老的理論依據(jù)28-29
• 4.7 SOD活性與MDA含量檢測的意義29-30
• 4.8 CyclinD、CDK4、pRb磷酸化狀態(tài)的意義30-31
• 4.9 前景與展望31-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻(xiàn)33-37
• 縮略詞表37-38
• 致謝38-39
• 綜述39-52
• 參考文獻(xiàn)48-52

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2 祝~=驤;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文編號：571390