本文關(guān)鍵詞：A群腦膜炎球菌多糖結(jié)合物原液中游離糖含量測(cè)定方法的建立及其驗(yàn)證

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【摘要】：目的建立A群腦膜炎球菌多糖結(jié)合物原液中游離糖含量測(cè)定的方法,并進(jìn)行驗(yàn)證。方法采用脫氧膽酸鈉(sodium deoxycholate,DOC)法,分別取1 ml 10、50、100、150、200、250、294μg/ml載體蛋白破傷風(fēng)類毒素(tetanus toxoid,TT),與100μl 1%DOC溶液(pH 7.3)混勻,離心收集上清,檢測(cè)蛋白含量,確定DOC沉淀載體蛋白范圍;用不同離子強(qiáng)度梯度的緩沖液(0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mol/L氯化鈉)稀釋游離多糖與載體蛋白混合物溶液,收集上清,檢測(cè)多糖含量,確定游離多糖分離條件;以1%DOC溶液作為稀釋劑繪制參考品磷含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線,確定DOC存在對(duì)磷含量測(cè)定結(jié)果的影響,建立DOC沉淀蛋白結(jié)合磷含量測(cè)定方法測(cè)定A群腦膜炎球菌多糖結(jié)合物中游離糖含量的方法,并對(duì)建立的方法進(jìn)行精密度、準(zhǔn)確性及重復(fù)性驗(yàn)證。結(jié)果 DOC沉淀載體蛋白濃度控制在250μg/ml以下;將0.8 mol/L氯化鈉溶液作為A群腦膜炎球菌多糖結(jié)合物中游離糖含量測(cè)定所需最佳稀釋液;以1%DOC溶液作為稀釋劑繪制的磷含量標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍在0~4μg/ml時(shí),r2為0.999 9。A群腦膜炎球菌多糖結(jié)合物原液及游離糖對(duì)照品與載體蛋白混合物沉淀中蛋白回收率在95%~110%之間;游離糖添加試驗(yàn)回收率均在95%以上;4批A群腦膜炎球菌多糖蛋白結(jié)合物游離糖含量平均值均在規(guī)定范圍內(nèi)。結(jié)論建立的DOC沉淀蛋白結(jié)合磷含量測(cè)定方法可有效分離結(jié)合物與游離多糖,并準(zhǔn)確測(cè)定結(jié)合物含量。
【作者單位】： 蘭州生物制品研究所有限責(zé)任公司甘肅省疫苗工程技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： A群腦膜炎球菌多糖結(jié)合物 游離糖 含量測(cè)定
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃課題(2008BAI66B01)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 腦膜炎奈瑟菌(簡(jiǎn)稱腦膜炎球菌)能引起流行性腦脊髓膜炎(簡(jiǎn)稱流腦),是一個(gè)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題。根據(jù)莢膜多糖抗原結(jié)構(gòu)及抗原特性的不同,可將腦膜炎球菌分為13個(gè)血清群,其中由A、B、C、W135和Y群腦膜炎球菌引起的病例占全世界發(fā)病總數(shù)的90%以上[1]。腦膜炎球菌莢膜多糖既是毒力

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【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李文春,戴曉暢,楊美峰,錢雯,施z

本文編號(hào)：566537