本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)錄因子CREB對TNFAIP1基因調(diào)控作用的研究

  更多相關(guān)文章： TNFAIP1基因 CREB Forskolin 神經(jīng)元

【摘要】：TNFAIP1是一個被鑒定為受腫瘤壞死因子α(TNF-α)誘導(dǎo)的蛋白,參與了DNA復(fù)制和損傷修復(fù)、細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)及某些神經(jīng)退行性疾病病變過程,如:阿爾茲海默癥(AD)。CREB(cAMP response element-binding protein)是一個重要的核轉(zhuǎn)錄因子,介導(dǎo)了神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,在神經(jīng)元的生長、發(fā)育、凋亡,以及突觸可塑性和學(xué)習(xí)記憶方面有重要調(diào)控作用。在本研究中,我們檢測了化學(xué)藥物Forskolin、Genistein、Valproic acid和Polydatin對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系(SKNSH)內(nèi)TNFAIP1基因表達(dá)的影響,發(fā)現(xiàn)Forskolin可以顯著降低TNFAIP1基因的mRNA水平和啟動子活性。而Forskolin是一種腺苷酸環(huán)化酶激活劑(Cyclic adenosine monophosphate,cAMP),能激活cAMP-CREB信號通路,因此我們進(jìn)一步探究了轉(zhuǎn)錄因子CREB與TNFAIP1基因的調(diào)控關(guān)系。KG-501是CREB蛋白的特異性抑制劑,實驗證明,它能顯著增強(qiáng)SKNSH細(xì)胞內(nèi)TNFAIP1蛋白水平。因此,當(dāng)過表達(dá)外源野生型CREB時,SKNSH細(xì)胞內(nèi)TNFAIP1基因啟動子活性和蛋白水平顯著降低,說明轉(zhuǎn)錄因子CREB能負(fù)調(diào)控TNFAIP1基因的表達(dá)。但是過表達(dá)突變型的CREBs133a或KCREB卻不能產(chǎn)生類似顯著效果,說明CREB的ser133磷酸化和DNA結(jié)合域在轉(zhuǎn)錄因子CREB調(diào)控TNFAIP1基因表達(dá)的過程中有重要作用。我們進(jìn)一步通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測是否TNFAIP1基因近端啟動子區(qū)域內(nèi)存在CREB結(jié)合位點(diǎn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)在-50和-196處有兩個cAMP應(yīng)答元件(CRE)。將這兩個CREs元件進(jìn)行缺失突變后,CREB對TNFAIP1基因啟動子活性的抑制作用明顯減弱。并且染色體免疫共沉淀實驗(ChIP)也證實,CREB能結(jié)合在TNFAIP1基因近端啟動子區(qū)域-290至-5以內(nèi),且包含CREs位點(diǎn)。說明CREB是通過結(jié)合在TNFAIP1基因近端啟動子區(qū)域內(nèi)的CRE元件上負(fù)調(diào)控TNFAIP1基因的表達(dá),并且進(jìn)一步實驗表明,CREB蛋白ser133的磷酸化在Forskolin下調(diào)TNFAIP1基因表達(dá)的過程中是不可缺少的。
【關(guān)鍵詞】：TNFAIP1基因 CREB Forskolin 神經(jīng)元
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R3416;Q78
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-11
• 1. 前言11-23
• 1.1 TNFAIP111-15
• 1.1.1 TNFAIP1基因11
• 1.1.2 TNFAIP1家族11-12
• 1.1.3 TNFAIP1蛋白分布與表達(dá)12
• 1.1.4 TNFAIP1功能12-15
• 1.2 CREB蛋白15-20
• 1.2.1 CREB蛋白簡介15
• 1.2.2 CREB蛋白家族簡介15-16
• 1.2.3 CREB相關(guān)信號通路16-17
• 1.2.4 CREB轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制17-18
• 1.2.5 CREB蛋白功能18-20
• 1.3 阿爾茨海默癥簡介20-21
• 1.4 課題研究背景和意義21-23
• 2. 材料和方法23-41
• 2.1 儀器設(shè)備23-24
• 2.2 材料與試劑24-28
• 2.2.1 細(xì)胞株和菌株24
• 2.2.2 質(zhì)粒載體和工具酶24
• 2.2.3 試劑盒和抗體24
• 2.2.4 抗體及藥物24-25
• 2.2.5 其他試劑25
• 2.2.6 溶液配方25-28
• 2.3 實驗方法28-41
• 2.3.1 報告基因載體構(gòu)建28-29
• 2.3.2 質(zhì)粒DNA中量制備29-31
• 2.3.3 細(xì)胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染及藥物處理31-33
• 2.3.4 RNA提取與實時熒光定量PCR33-35
• 2.3.5 熒光素酶實驗35
• 2.3.6 Western blot檢測35-37
• 2.3.7 染色體免疫共沉淀（CHIP）檢測37-40
• 2.3.8 數(shù)據(jù)分析40-41
• 3. 實驗結(jié)果41-49
• 3.1 成功構(gòu)建TNFAIP1及CREs元件缺失突變的螢光素酶報告載體41
• 3.2 Forskolin對SKNSH細(xì)胞內(nèi)TNFAIP1基因mRNA水平和啟動子活性的影響41-43
• 3.3 CREB對SKNSH細(xì)胞內(nèi)TNFAIP1基因表達(dá)的影響43-45
• 3.4 CREB依賴CREs元件抑制TNFAIP1基因的啟動子活性45-47
• 3.5 CREB能與TNFAIP1基因的近端啟動子結(jié)合47-48
• 3.6 CREB磷酸化對Forskolin引發(fā)的TNFAIP1基因下調(diào)作用的影響48-49
• 4. 討論49-51
• 參考文獻(xiàn)51-59
• 中英文縮寫表59-61
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄61-62
• 致謝62

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1 暢曉燕;核蛋白CREB的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);2002年03期

2 余瑞元,王燕峰,徐長法;CREB研究進(jìn)展[J];中國生物工程雜志;2003年01期

3 毛鳳霞;姚梅玲;;CREB與學(xué)習(xí)記憶及情緒關(guān)系[J];醫(yī)藥論壇雜志;2008年22期

4 張廣輝;王超峰;;CREB依賴的突觸長時程增強(qiáng)[J];中國醫(yī)學(xué)物理學(xué)雜志;2011年04期

5 宋海龍;鄭焱;王曉民;;CREB信號通路在神經(jīng)系統(tǒng)中的調(diào)控及功能[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2013年09期

6 劉永強(qiáng);倪曉華;周丹;王鑫;郭偉偉;;人CREB4轉(zhuǎn)核機(jī)制的初步研究[J];華東師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2007年02期

7 ;Cyclic AMP response element binding protein(CREB) participates in the heat-inducible expression of human hsp90β gene[J];Chinese Science Bulletin;2001年19期

8 張云東;顧小紅;朱佩芳;王正國;周繼紅;許民輝;;促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素對下丘腦神經(jīng)元CREB的調(diào)控[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2008年09期

9 葛軍;張玉;鄭增長;黃延旺;宋紅生;;CREB轉(zhuǎn)錄因子及其磷酸化信號通路的研究進(jìn)展[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2010年30期

10 張云東;顧小紅;朱佩芳;王正國;趙繼宗;周繼紅;許民輝;鄒詠文;;促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素對下丘腦神經(jīng)元鈣信號和CREB的調(diào)節(jié)作用(英文)[J];中國臨床康復(fù);2005年45期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 毛鳳霞;;CREB與學(xué)習(xí)記憶及情緒關(guān)系[A];經(jīng)濟(jì)策論（下）[C];2011年

2 劉明月;胡園;穆麗華;黃志雄;余冰穎;劉屏;;基于CREB通路研究3,6′-二芥子�；崽堑纳窠�(jīng)保護(hù)分子機(jī)制[A];第十五屆中國神經(jīng)精神藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2012年

3 劉健;張濤;何秀娟;許蜀閩;王培勇;;主動脈平滑肌細(xì)胞鈣信號與CREB活性的關(guān)系[A];第八次全國動脈硬化性疾病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2005年

4 Shuaishuai Huang;Ren Yu;Ping Wang;Xue Wang;Rong Fang;Jeff X.Zhou;;CaSR-increased[Ca~(2+)]i,modulates cytoskeletal subtype genes through transcriptional regulation of CREB in cancer cells[A];華東六省一市第22屆解剖與組織胚胎學(xué)學(xué)術(shù)年會暨山東解剖學(xué)會成立60周年紀(jì)念大會論文匯編[C];2013年

5 李軍;曹紅;李國政;連慶泉;;CREB與缺血性腦損傷[A];2008年第七次華東六省一市麻醉學(xué)學(xué)術(shù)會議暨浙江省麻醉學(xué)術(shù)年會論文匯編（上冊）[C];2008年

6 Yu-xian Yan;Yong Guo;Yuan Zhang;Yue-ying Song;Yuan-wei Gong;Qi Lv;Chen-yan Wang;Xi-zheng Zhang;;Mechanical Strain regulates osteoblast proliferation through Ca~(2+)-CaMK-CREB Signal Pathway[A];第十屆全國生物力學(xué)學(xué)術(shù)會議暨第十二屆全國生物流變學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2012年

7 高亞南;高歌;龍彩瑕;李俊發(fā);;重復(fù)性低氧對小鼠腦內(nèi)CREB磷酸化及蛋白表達(dá)的影響[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)會議暨學(xué)會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

8 胡海燕;張瑞;張永芳;夏宗勤;胡雅兒;;CREB在知母皂苷元調(diào)節(jié)M1受體中的作用[A];第九屆中國中西醫(yī)結(jié)合實驗醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2009年

9 胡海燕;張瑞;張永芳;夏宗勤;胡雅兒;;CREB在知母皂苷元調(diào)節(jié)M1受體中的作用[A];中國核科學(xué)技術(shù)進(jìn)展報告——中國核學(xué)會2009年學(xué)術(shù)年會論文集（第一卷·第9冊）[C];2009年

10 涂海軍;許嬋娟;PHILIPPE RONDARD;JEAN-PHILIPPE PIN;劉劍峰;;GABA_BR介導(dǎo)的CREB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 邁文;CREB1可致女性抑郁癥[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2002年

2 日信;CREB基因活化可提高記憶力[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2003年

3 余志平 編譯;尋找逝去的記憶[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊慧鵬;昆蟲CREB激活機(jī)制及Arrestin蛋白功能的研究[D];浙江大學(xué);2013年

2 鄧亮;CREB-1在TGF-β3抗肝纖維化中的作用[D];華中科技大學(xué);2013年

3 黃金明;CREB-1載體的構(gòu)建及其對HSC中內(nèi)源性TGF-β3分泌的影響[D];華中科技大學(xué);2012年

4 譚蕾;CREB信號通路在氯胺酮致發(fā)育期大鼠海馬神經(jīng)毒性中的作用[D];華中科技大學(xué);2009年

5 黃文晉;ERK1/2，，CREB和aczonin在神經(jīng)系統(tǒng)中功能的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2000年

6 曹根濤;人類基因CREB4和4.10的克隆和功能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2004年

7 謝敏;NR2B介導(dǎo)的泛素-蛋白酶體系統(tǒng)成分的功能障礙對CREB活性的影響[D];華中師范大學(xué);2014年

8 江雙紅;CREB在氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜新生血管的作用及機(jī)制研究[D];武漢大學(xué);2013年

9 吳勇;NSCLC差異蛋白的篩選及CREB/p-CREB在NSCLC中的臨床意義[D];吉林大學(xué);2010年

10 張信美;雌激素調(diào)控MAPK/CREB信號通路致子宮內(nèi)膜異位癥疼痛的分子機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王培軍;CREB在急性髓細(xì)胞白血病和骨髓增生異常綜合征中的表達(dá)及其臨床意義[D];華中科技大學(xué);2011年

2 林浴坤;從氧化應(yīng)激及CREB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路探討電針對局灶性腦缺血模型大鼠學(xué)習(xí)記憶的影響[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 馮利飛;CREB3L1和PTN在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及臨床意義[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 宋娜娜;企鵝珍珠貝Creb基因克隆分析及黑色素合成抑制劑和增強(qiáng)劑對幼貝生長性狀影響的研究[D];廣東海洋大學(xué);2015年

5 王雪;轉(zhuǎn)錄因子CREB在腎癌發(fā)生和轉(zhuǎn)移中的作用及其分子機(jī)制研究[D];寧波大學(xué);2015年

6 肖慧;轉(zhuǎn)錄因子CREB對TNFAIP1基因調(diào)控作用的研究[D];湖南師范大學(xué);2015年

7 高永娟;人類基因CREB4的功能初步研究[D];華東師范大學(xué);2005年

8 劉永強(qiáng);人CREB4轉(zhuǎn)核機(jī)制的初步研究[D];華東師范大學(xué);2006年

9 劉明月;基于CREB-BDNF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究開心散及其主要成分3，6'-二芥子酰基蔗糖促神經(jīng)保護(hù)和抗抑郁的作用機(jī)制[D];河北北方學(xué)院;2013年

10 汪婷婷;開心散代表性成分激活CREB-BDNF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的藥物—網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2014年

本文編號：550839