發(fā)布時(shí)間：2017-07-15 19:11

  本文關(guān)鍵詞：生長期兔髁突纖維軟骨細(xì)胞和骨骺透明軟骨細(xì)胞生物學(xué)特性的比較研究

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【摘要】：目的建立軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)模型,研究纖維軟骨和透明軟骨的生物學(xué)差異。方法分離4周齡雌性兔雙側(cè)髁突軟骨和膝關(guān)節(jié)骨骺軟骨,采用胰酶和膠原酶聯(lián)合消化的方法收集軟骨細(xì)胞,分別進(jìn)行體外培養(yǎng)并連續(xù)傳代至P10。使用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài);采用阿利新藍(lán)和Ⅱ型膠原免疫組化染色的方法分別對髁突纖維軟骨細(xì)胞和骨骺透明軟骨細(xì)胞進(jìn)行鑒定;用細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法繪制生長曲線;運(yùn)用熒光定量PCR和Western印跡技術(shù)對軟骨特異性指標(biāo)Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原、SOX9和Aggrecan進(jìn)行檢測,并使用SPSS 13.0軟件包對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果倒置顯微鏡觀察示,髁突纖維軟骨細(xì)胞和骨骺透明軟骨細(xì)胞形態(tài)均會(huì)隨細(xì)胞傳代而發(fā)生改變,且P2代以后改變明顯;基因和蛋白水平的檢測均證實(shí)P2代后軟骨細(xì)胞去分化明顯。阿利新藍(lán)和Ⅱ型膠原免疫組化染色鑒定結(jié)果均為陽性,對照組為陰性。實(shí)時(shí)定量熒光PCR和Western印跡結(jié)果證明:在纖維軟骨中,Ⅰ型膠原的表達(dá)量高于透明軟骨;而Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原、SOX9和Aggrecan的表達(dá)量卻明顯低于透明軟骨。結(jié)論使用本方法培養(yǎng)軟骨細(xì)胞簡單有效;髁突纖維軟骨細(xì)胞和骨骺透明軟骨細(xì)胞體外培養(yǎng)均存在去分化現(xiàn)象,且兩者Ⅰ型膠原、Ⅱ型膠原、Ⅹ型膠原、SOX9和Aggrecan的表達(dá)存在顯著差異,生物學(xué)特性并不相同。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院·口腔醫(yī)學(xué)院口腔外科上海市口腔醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 兔 髁突 骨骺 纖維軟骨 透明軟骨 生物學(xué)特性
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81200766,81070848) 上海市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)資助項(xiàng)目(08DZ2271100,114119a3800,13140902702,13XD1402300)
【分類號】：R329.24
【正文快照】： 髁突是頜面部重要的生長中心之一,主要以軟骨內(nèi)成骨的方式進(jìn)行生長和改建。髁突軟骨內(nèi)成骨調(diào)控機(jī)制的研究對于臨床診治和基礎(chǔ)研究都具有極其重要的意義。目前,國內(nèi)外主要以骨骺為研究對象,對軟骨內(nèi)成骨相關(guān)機(jī)制進(jìn)行了較為深入的研究[1],而對髁突軟骨內(nèi)成骨的調(diào)控機(jī)制研究較少

【參考文獻(xiàn)】

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1 張e，

本文編號：545326