本文關(guān)鍵詞：表皮葡萄球菌agrC蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建及蛋白表達(dá)

  更多相關(guān)文章： 表皮葡萄球菌 agrC 細(xì)菌生物膜 生物材料植入感染 原核表達(dá)

【摘要】：[目的]研究溶葡萄球菌酶在提取表皮葡萄球菌基因組DNA中的作用,構(gòu)建表皮葡萄球菌agrC原核表達(dá)載體,表達(dá)agrC蛋白,為合成以agrC為靶點(diǎn)治療表皮葡萄球菌生物膜形成相關(guān)感染的特異性多肽藥物奠定基礎(chǔ)。[方法]對傳統(tǒng)酶解法進(jìn)行改良,加入溶葡萄球菌酶與溶菌酶共同破壁,比較不同劑量溶葡萄球菌酶提取表皮葡萄球菌基因組DNA的效果,提取表皮葡萄球菌成膜陽性標(biāo)準(zhǔn)株RP62a基因組DNA;采用PCR技術(shù)擴(kuò)增出agrC基因片段,采用T-A克隆技術(shù)構(gòu)建agrC重組克隆載體；使用pET28a(+)質(zhì)粒構(gòu)建agrC原核表達(dá)載體,利用IPTG誘導(dǎo)agrC蛋白表達(dá)；采用PCR、雙酶切反應(yīng)及引物測序法對重組克隆載體和原核表達(dá)載體進(jìn)行驗(yàn)證,采用western blot技術(shù)鑒定agrC蛋白。[結(jié)果]溶葡萄球菌酶與溶菌酶共同孵育可提高表皮葡萄球菌基因組DNA濃度,并且濃度在一定程度上隨溶葡萄球菌酶劑量的增加而增加,獲得了表皮葡萄球菌agrC基因片段(約1290bp);構(gòu)建pMD-agrC重組克隆載體,構(gòu)建pET28a(+)-agrC原核表達(dá)載體,表達(dá)出agrC蛋白(約43KD)。[結(jié)論]在傳統(tǒng)酶解法中加入溶葡萄球菌酶可協(xié)助表皮葡萄球菌破壁;能提高表皮葡萄球菌基因組DNA提取效率；通過T-A克隆技術(shù)構(gòu)建agrC重組克隆載體可穩(wěn)定有效的保存agrC基因,pET原核表達(dá)系統(tǒng)可在IPTG誘導(dǎo)下成功表達(dá)完整的agrC蛋白。
【關(guān)鍵詞】：表皮葡萄球菌 agrC 細(xì)菌生物膜 生物材料植入感染 原核表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R378.11
【目錄】：

• 縮略詞表8-10
• 中文摘要10-11
• 英文摘要11-13
• 前言13-16
• 材料16-21
• 菌株和質(zhì)粒16
• 試劑16-17
• 主要儀器設(shè)備17-18
• 主要溶液和試劑配制18-21
• 方法及步驟21-33
• 改良酶解法提取表皮葡萄球菌RP62a基因組DNA21-23
• 采用PCR技術(shù)擴(kuò)增表皮葡萄球菌agrC基因23-25
• 采用T-A克隆法構(gòu)建agrC基因的重組克隆載體25-29
• 使用pET28α(+)表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建agrC重組蛋白原核表達(dá)載體29-30
• 利用IPTG誘導(dǎo)agrC重組蛋白的原核表達(dá)30-33
• 結(jié)果33-46
• 改良酶解法提取表皮葡萄球菌RP62a基因組DNA的結(jié)果33-35
• agrC基因的PCR檢測結(jié)果35
• agrC基因的T-A克隆結(jié)果35-39
• agrC基因重組表達(dá)載體構(gòu)建結(jié)果39-46
• 討論46-54
• 參考文獻(xiàn)54-58
• 綜述58-70
• 參考文獻(xiàn)65-70
• 攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果70-71
• 致謝71

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1 成鵬;表皮葡萄球菌agrC蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建及蛋白表達(dá)[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2016年

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本文編號：544719