本文關(guān)鍵詞：流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的方法學(xué)探討

  更多相關(guān)文章： 巨噬細(xì)胞 流式細(xì)胞術(shù) 吞噬能力 熒光微球

【摘要】：目的:探討利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬熒光微球能力試驗(yàn)方法的靈敏性、穩(wěn)定性以及易操作性,以期獲得一套最優(yōu)化的方案。方法:取ICR小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,以原液和1∶1稀釋液使用,采用三個(gè)微球濃度(5×106/孔、1×107/孔和1.5×107/孔),經(jīng)1 h、1.5 h和2 h孵育,通過(guò)酶消化或細(xì)胞刮刀法將貼壁細(xì)胞消化處理后,利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)含不同數(shù)量熒光微球的巨噬細(xì)胞數(shù)值,計(jì)算吞噬率及吞噬指數(shù)。為驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)條件的可靠性,取ICR小鼠每日灌胃金葵素膠囊30 d后,取腹腔巨噬細(xì)胞分別用流式細(xì)胞術(shù)和傳統(tǒng)雞紅細(xì)胞方法檢測(cè)吞噬能力。結(jié)果:微球濃度越高,吞噬率和吞噬指數(shù)越大;細(xì)胞濃度為1×105~2×105ml-1,孵育時(shí)間1.5 h,微球濃度為1.5×107/孔時(shí)吞噬率(PP)和吞噬指數(shù)(PI)最高(89.87%,1.54),孵育至2 h時(shí)出現(xiàn)下降(57.71%,1.51);細(xì)胞濃度對(duì)吞噬率和吞噬指數(shù)的影響與熒光微球濃度呈負(fù)相關(guān)。貼壁巨噬細(xì)胞經(jīng)胰酶加EDTA消化后PP為44.51%,PI為0.68,單獨(dú)使用EDTA消化后PP為37.92%,PI為0.57,均低于使用細(xì)胞刮刀處理組。流式細(xì)胞術(shù)法與雞紅細(xì)胞法測(cè)定金葵素膠囊對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力影響的結(jié)果一致,均為高劑量組吞噬率與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:小鼠腹腔巨噬細(xì)胞濃度調(diào)整為1×105~2×105,孵育1 h,1×107/孔微球濃度可使實(shí)驗(yàn)快速而又精確地反映巨噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù),且與傳統(tǒng)方法結(jié)果有良好的一致性。
【作者單位】： 江蘇省疾病預(yù)防控制中心 毒理與功能評(píng)價(jià)所;
【關(guān)鍵詞】： 巨噬細(xì)胞 流式細(xì)胞術(shù) 吞噬能力 熒光微球
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(81302466)資助
【分類號(hào)】：R392.1
【正文快照】： 巨噬細(xì)胞是固有免疫系統(tǒng)的重要成員,具有吞噬、清除及呈遞抗原異物的生物學(xué)功能,是維持機(jī)體的正常生理狀態(tài)所必需的[1]。傳統(tǒng)的顯微鏡鏡檢記數(shù)法檢測(cè)巨噬細(xì)胞吞噬能力存在主觀性強(qiáng)、重復(fù)性差及耗時(shí)長(zhǎng)等缺點(diǎn),影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的客觀性與準(zhǔn)確性。流式細(xì)胞儀技術(shù)用于巨噬細(xì)胞的吞噬率

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