發(fā)布時間：2017-07-07 13:12

  本文關(guān)鍵詞：Dvl1及其突變體腺病毒載體的構(gòu)建與在MSCs中表達鑒定

  更多相關(guān)文章： 間充質(zhì)干細胞 腺病毒載體 Dvl

【摘要】：Dvl1及其結(jié)構(gòu)缺失突變體ΔDIX(dsh and axin)和ΔDEP(dsh,Egl-10 and pleckstrin)腺病毒載體的構(gòu)建并驗證其在MSCs(mesenchymal stem cells)中的表達情況。將目的基因定向克隆至pAdTrack-CMV穿梭載體上,并經(jīng)PmeⅠ線性化后在BJ5183細菌中與pAdEasy-1骨架質(zhì)粒同源重組,獲得重組腺病毒載體,在QBI-293A細胞中包裝及擴增,實時熒光定量PCR和Western bolt驗證Dvl1在MSCs中的表達情況。經(jīng)PCR、PacⅠ單酶切鑒定及測序分析,成功構(gòu)建Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒載體,目的基因序列與GenBank報道一致,并選出150 MOI為最適感染MSCs的感染復數(shù),成功構(gòu)建了Ad-Dvl1、Ad-ΔDIX和Ad-ΔDEP腺病毒載體,并獲得高滴度的病毒子,qPCR和Western blot證實Dvl1在MSCs中高表達并增加了β-catenin在細胞中的累積,為進一步研究Dvl1在MSCs遷移過程的作用奠定了基礎。
【作者單位】： 蘇州大學基礎醫(yī)學與生物科學學院 江蘇省干細胞研究重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： 間充質(zhì)干細胞 腺病毒載體 Dvl
【分類號】：R346
【正文快照】： Dishevelled(Dsh/Dvl)由Fahmy和Fahmy(1959)在研究果蠅體軸的定向和翅毛的發(fā)育過程中發(fā)現(xiàn)并鑒定。在脊椎動物中Dvl有三種亞型分別為Dvl1、Dvl2和Dvl3,三種亞型在胚胎及多種組織中均有表達(Bartis et al.,2013)。研究表明Dvl是細胞質(zhì)中的多功能蛋白,在Wnt信號通路激活過程中Dvl

【參考文獻】

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本文編號：530328