本文關(guān)鍵詞：載脂蛋白A-I突變體重組高密度脂蛋白對轉(zhuǎn)錄因子ATF3的影響

  更多相關(guān)文章： 重組高密度脂蛋白 炎癥反應(yīng) 脂多糖 RAW264.7 細(xì)胞 ATF3

【摘要】：背景:ATF3在抑制炎癥信號中通過抑制TLR的產(chǎn)生而發(fā)揮重要作用,高密度脂蛋白(HDL)或其主要蛋白成份Apo A-I具有顯著的抗炎癥作用。本研究探討載脂蛋白A-I(Apo A-I)及其半胱氨酸突變體重組高密度脂蛋白對ATF3表達(dá)量的影響。方法:(1)利用pET原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)載脂蛋白A-I74,A-I228,A-Im和A-IWT,親和層析純化后,加入DPPC,制作成重組高密度脂蛋白。(2)培養(yǎng)RAW264.7細(xì)胞,LPS刺激誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞模型,然后給于重組高密度脂蛋白干預(yù),ELISA試劑盒檢測炎癥因子IL-6和TNF-α的表達(dá)水平,觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變,RT-PCR和western blotting檢測細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄激活因子ATF3 m RNA和蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果:細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),與正常組比較,LPS組與rHDL228組細(xì)胞形態(tài)趨向于巨噬細(xì)胞化并出現(xiàn)降解,rHDL74、rHDLM和rHDLWT對LPS刺激的細(xì)胞有不同的保護(hù)作用。ELISA檢測發(fā)現(xiàn),rHDL74、rHDLm和rHDLwt中TNF-ɑ與IL-6的表達(dá)水平恢復(fù)到接近空白對照組水平,rHDL 228組TNF-ɑ與IL-6水平較較空白對照組明顯升高(p0.01)。rHDL74、rHDLM和rHDLWT中TNF-ɑ與IL-6水平較LPS組明顯降低(P0.01)。Western blotting結(jié)果顯示,與對照組相比,LPS組與rHDL 228組ATF3的表達(dá)水平下降,具有顯著性差異(p0.01)。rHDL74、rHDLM和rHDLWT組表達(dá)水平明顯升高且差異顯著(p0.05)。結(jié)論:重組高密度脂蛋白rHDL74、rHDLWT、rHDLM促進(jìn)ATF3在m RNA和蛋白水平上的表達(dá)。而rHDL228下調(diào)其表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：重組高密度脂蛋白 炎癥反應(yīng) 脂多糖 RAW264.7 細(xì)胞 ATF3
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R364.5
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一章 實(shí)驗(yàn)材料9-13
• 1.1 細(xì)胞株9
• 1.2 菌株9
• 1.3 實(shí)驗(yàn)器材9-10
• 1.4 主要試劑耗材10
• 1.5 主要試劑配制10-11
• 1.6 Western blotting試劑配制11-13
• 第二章 實(shí)驗(yàn)方法13-26
• 2.1 IPTG誘導(dǎo)大腸桿菌中目的蛋白的表達(dá)及純化13-17
• 2.1.1 大腸桿菌的復(fù)蘇13-14
• 2.1.2 用Ni2+親和柱對重組載脂蛋白進(jìn)行純化14
• 2.1.3 分析表達(dá)的目的蛋白為何種形式存在14
• 2.1.4 對濃縮后蛋白進(jìn)行透析和蛋白濃度的測定14-15
• 2.1.5 BCA法測蛋白15-16
• 2.1.6 樹脂再生16
• 2.1.7 重組蛋白去內(nèi)毒素16-17
• 2.1.8 脂質(zhì)體的包裝17
• 2.2 重組高密度脂蛋白抗炎作用的研究17-24
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞17-18
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)分組18
• 2.2.3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察18
• 2.2.4 熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)18-19
• 2.2.5 總RNA的提取19
• 2.2.6 RNA瓊脂糖電泳檢測RNA純度和完整性19
• 2.2.7 cDNA的合成方法19-21
• 2.2.8 Real-time PCR檢測mRNA相對表達(dá)21
• 2.2.9 ELISA試劑盒檢測細(xì)胞培養(yǎng)夜中TNF-α 和IL-6 炎癥因子的表達(dá)21-22
• 2.2.10 Western blot檢測ATF3在不同的重組HDL中的表達(dá)情況22-24
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法檢測24-26
• 第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-31
• 3.1 重組高密度脂蛋白的表達(dá)純化分析26
• 3.2 RAW264.7 細(xì)胞經(jīng)LPS刺激后加入不同的高密度脂蛋白處理后細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化26-27
• 3.3 重組高密度脂蛋白對細(xì)胞培養(yǎng)液中炎癥因子TNF-ɑ和IL-6 表達(dá)水平的影響27-28
• 3.4 不同高密度脂蛋白對RAW264.7 細(xì)胞中ATF3 mRNA相對表達(dá)量的影響28-29
• 3.5 不同高密度脂蛋白對RAW264.7 細(xì)胞中ATF3mRNA相對表達(dá)量的影響29-31
• 第四章 討論31-34
• 結(jié)論34-35
• 參考文獻(xiàn)35-41
• 綜述41-64
• 參考文獻(xiàn)51-64
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果64-65
• 英文縮略詞表65-67
• 致謝67

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 鐘巧青;趙水平;董靜;吳智鴻;謝湘竹;于碧蓮;董劭壯;;高密度脂蛋白對炎癥狀態(tài)下脂肪細(xì)胞功能的保護(hù)作用[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2007年07期

2 鐘巧青;趙水平;王星;于碧蓮;董靜;謝湘竹;吳智鴻;;高密度脂蛋白對3T3-L1脂肪細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素8的影響[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;2010年10期

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本文編號：526331