本文關(guān)鍵詞：STZ誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型睪丸組織中NGF、VEGF表達(dá)變化

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【摘要】：目的:通過觀察鏈脲佐菌素(Streptozocin,STZ)誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型睪丸組織中神經(jīng)生長因子(Nerve growth factor,NGF)、血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)表達(dá)與分布情況的變化,并探究睪丸組織中NGF與VEGF表達(dá)之間的關(guān)系,為治療糖尿病致睪丸功能障礙等疾病提供了理論基礎(chǔ)及新的治療方向。方法:選用清潔級4周齡健康雄性C57BL/6小鼠50只,體重18~20g,購自河北醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心。適應(yīng)性生長1周,實驗動物隨機(jī)分為A組、B組:A組25只C57BL/6小鼠和B組25只C57BL/6小鼠。將C57BL/6小鼠禁食8小時后稱取體重,A組按照200mg/Kg的劑量腹腔注射配制好的STZ溶液(用0.l mol/L無菌、p H 4.4檸檬酸緩沖液配制,經(jīng)0.2μm微孔濾膜過濾滅菌),B組腹腔注射等劑量p H 4.4檸檬酸緩沖液。注射STZ一周后尾靜脈取血監(jiān)測C57BL/6小鼠的血糖變化,及時觀察C57BL/6小鼠的體重變化、尿量變化和飲食狀況。C57BL/6小鼠出現(xiàn)多飲、多食、多尿,體重減輕,血糖高于11.1mmol/L即為糖尿病小鼠模型制備成功。A組成模20只,成模率80%。A組中隨機(jī)選取18只繼續(xù)進(jìn)行試驗,分為糖尿病組(DM Group)。B組中隨機(jī)選取18只,為對照組(Control Group)。分別在糖尿病小鼠模型制備成功后第8周、第12周、第20周末隨機(jī)取兩組小鼠各6只,頸椎脫臼法處死小鼠,解剖取睪丸組織,置入10%福爾馬林(4%甲醛)固定,用于石蠟包埋制備組織切片。分別行HE染色、免疫組化染色,通過免疫組化方法檢測小鼠睪丸組織中NGF、VEGF表達(dá)情況。陽性對照由試劑公司提供,應(yīng)用PBS代替一抗的組織切片做陰性對照,光鏡下陽性部位為棕黃色,細(xì)胞核呈淡藍(lán)色。免疫組化結(jié)果應(yīng)用NDP數(shù)字病理掃描儀采集圖像,每張切片睪丸范圍內(nèi)隨機(jī)選取曲細(xì)精管分布均勻的5個視野(400×)作為觀察區(qū),并用Image-Pro Plus6.0圖像分析軟件測量積分光度值(Integrated optical density IOD),以各組的均值和標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行比較。結(jié)果:1小鼠的一般狀況糖尿病組小鼠實驗進(jìn)程中,逐漸表現(xiàn)出被毛蓬松,污穢無澤,易脫落,活動減少,明顯多飲、多食、多尿,體重較對照組減輕明顯,血糖≥11.1mmol/L,明顯高于對照組(P0.01)。對照組小鼠反應(yīng)靈敏、精神狀態(tài)良好,動作自如、活躍,毛發(fā)光亮順滑。2小鼠體重及血糖變化糖尿病組小鼠在造模成功后就出現(xiàn)血糖異常癥狀(血糖≥11.1mmol/L),為13.74±2.71mmol/L,對照組血糖在正常水平為4.37±0.89mmol/L,兩組具有極其顯著的差異(P0.01)。3糖尿病小鼠睪丸組織形態(tài)改變睪丸組織切片HE染色后,光鏡觀察結(jié)果顯示,糖尿病組曲細(xì)精管萎縮,各級精母細(xì)胞數(shù)量減少,曲細(xì)精管基膜變薄、破損、缺失。生精上皮結(jié)構(gòu)排列紊亂,生精細(xì)胞脫落,曲細(xì)精管管腔內(nèi)精子減少,支持細(xì)胞出現(xiàn)變性、空泡化。個別曲細(xì)精管僅見緊貼基膜的支持細(xì)胞及精原細(xì)胞,而其余各級精母細(xì)胞及精子減少或消失,表現(xiàn)為生精障礙。睪丸組織中間質(zhì)組織增生,毛細(xì)血管管腔閉塞并附血栓。間質(zhì)細(xì)胞數(shù)目減少,胞質(zhì)濃縮,細(xì)胞核扁圓或橢圓形且核濃染,細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)還可見空泡。4免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果在兩組小鼠睪丸組織中均可發(fā)現(xiàn)NGF、VEGF表達(dá)的陽性顆粒,NGF的免疫復(fù)合物位于Sertoli支持細(xì)胞的細(xì)胞核,次級精母細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì),精子細(xì)胞的類圓形泡狀結(jié)構(gòu)中。在實驗組中,隨著試驗周數(shù)的增加,小鼠睪丸內(nèi)的NGF明顯呈下降趨勢,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而在對照組中,隨著試驗周數(shù)的增加,NGF無明顯變化,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。在周齡相同的小鼠中,實驗組較對照組睪丸內(nèi)的NGF降低,兩組間比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。小鼠睪丸內(nèi)的VEGF免疫組化復(fù)合物只位于Leydig和Sertoli細(xì)胞內(nèi)。在實驗組中,隨著試驗周數(shù)的增加,小鼠睪丸內(nèi)的VEGF明顯呈下降趨勢,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而在對照組中,隨著試驗周數(shù)的增加,VEGF無明顯變化,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。在周齡相同的小鼠中,實驗組較對照組VEGF降低,且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。5 VEGF、NGF的相關(guān)性小鼠睪丸組織內(nèi)VEGF與NGF水平在相關(guān)性分析中,存在強(qiáng)正相關(guān)性(r=0.778,P0.01)。結(jié)論:研究成果表明,在糖尿病小鼠睪丸組織內(nèi),曲細(xì)精管受損,各級精母細(xì)胞丟失。糖尿病小鼠睪丸內(nèi)VEGF和NGF表達(dá)水平均降低,同時伴隨細(xì)胞凋亡增加和睪丸組織損傷。證實睪丸中NGF及VEGF表達(dá)隨糖尿病病程進(jìn)展呈下降趨勢,進(jìn)而推測糖尿病是睪丸腫瘤與睪丸生殖功能障礙的病因之一,為糖尿病引起的睪丸腫瘤與生殖功能障礙的發(fā)病機(jī)制提供新的思路和理論依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：鏈脲佐菌素 糖尿病小鼠 睪丸 免疫組化 神經(jīng)生長因子 血管內(nèi)皮生長因子
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-24
• 附表24-27
• 討論27-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-35
• 綜述 糖尿病睪丸損傷的病理變化與防治35-47
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 致謝47-48
• 個人簡歷48

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：525681