本文關鍵詞：結核分枝桿菌Zmp1基因原核表達載體的構建及表達鑒定

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【摘要】：目的構建結核分枝桿菌鋅離子依賴的金屬蛋白酶1(Zmp1)基因的原核表達載體,并在大腸桿菌中進行表達。方法以卡介苗(BCG)基因組DNA為模板,采用PCR法擴增Zmp1基因;定向克隆到原核表達載體pET-32a(+)的多克隆位點中,構建重組原核表達質粒pET-32a(+)-Zmp1;轉化入大腸桿菌BL21(DE3)中經IPTG誘導表達,表達產物經SDS-PAGE和Western blot法鑒定。結果PCR法擴增出Zmp1基因;重組表達質粒經雙酶切及基因測序鑒定構建正確;表達的重組Zmp1融合蛋白相對分子質量(Mr)約為94 000,大小與預期融合蛋白一致;重組Zmp1融合蛋白可與His標簽單克隆抗體特異性結合。結論成功構建了Zmp1基因原核表達載體,并在大腸桿菌BL21(DE3)中獲得重組Zmp1融合蛋白表達。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院病原生物學教研室;重慶醫(yī)科大學分子醫(yī)學與腫瘤研究中心;
【關鍵詞】： 結核分枝桿菌 Zmp 原核表達
【基金】：重慶市自然科學基金(cstc2012jjA10023) 國家自然科學基金(30771922,30901280)
【分類號】：R378.911
【正文快照】： 由結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的結核病(tuberculosis,TB)是嚴重危害人類健康的慢性傳染病,全球有近1/3人口感染了結核菌,每年新發(fā)結核病例約870萬例,每年死于結核病的人數高達200萬[1]。結核病至今仍未取得有效控制,除與卡介苗(Bacillus Calmette-

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