本文關鍵詞：慢病毒介導人PERK基因修飾對內質網應激介導凋亡的影響

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【摘要】：目的構建人蛋白激酶R樣內質網激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)慢病毒載體并包裝慢病毒顆粒(lentivirus),探討成肌細胞C2C12中PERK基因慢病毒修飾對內質網應激介導凋亡的作用。方法設計并合成人PERK基因的上、下游引物,采用PCR方法從真核質粒pcDNA3.l(-)-PERK中擴增目的基因。鑒定后與慢病毒載體pWPT-GFP進行重組,再將重組慢病毒載體pWPT-GFP-PERK與慢病毒包裝質粒pMD2G、pSPAX2共轉入293T細胞中,進一步包裝形成PERK慢病毒(LV-PERK);收集轉染后48h的細胞上清,體外感染成肌細胞C2C12,觀察綠色熒光蛋白(GFP)感染效率,并應用流式細胞儀(FCM)檢測內質網應激時重組慢病毒PERK對C2C12細胞增殖凋亡的影響,蛋白質印跡法檢測凋亡相關基因Cleaved Caspase-3與Chop蛋白的表達。結果成功構建和包裝了滴度為4.2×108 efu/mL的PERK重組慢病毒。FCM檢測結果表明,TM+LV-PERK處理組G1期細胞比例為54.37%,低于TM組(77.91%)和LV-GFP組(66.41%);TM+LVPERK處理組S期細胞比例為31.36%,高于TM組(12.14%)和LV-GFP組(16.96%),各組差異均具有統(tǒng)計學意義(P0.05);此外,TM+LV-PERK處理組細胞凋亡率為25.91%,高于TM組(11.79%)和Ad-GFP組(11.24%),各組差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫印跡檢測Cleaved Caspase-3和Chop蛋白的表達與FCM結果一致。結論成功構建和包裝LVPERK重組慢病毒顆粒,在內質網應激時,LV-PERK慢病毒可促進C2C12細胞的增殖和凋亡。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學細胞生物學及遺傳學教研室;重慶醫(yī)科大學發(fā)育生物學與模式動物平臺;
【關鍵詞】： PERK 慢病毒 成肌細胞 內質網應激 細胞凋亡
【基金】：國家自然科學基金(81371928,81171697) 教育部新世紀優(yōu)秀人才支持計劃(NCET-12-1090) 人力資源和社會保障部留學回國人員擇優(yōu)資助項目(2011-235)~~
【分類號】：R3416
【正文快照】： Influence of lentivirus modification of human PERKgene on endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosisZHANG Peng,XIA Fei,LI Mei-ling,HAN Xiao-feng,GUO Feng-jin*1.Department of Cell Biology and Genetics,Chongqing Medical University,Chongqing 400016,Chi

【參考文獻】

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本文編號：517277