本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)人PERK基因修飾對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)凋亡的影響

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【摘要】：目的構(gòu)建人蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)慢病毒載體并包裝慢病毒顆粒(lentivirus),探討成肌細(xì)胞C2C12中PERK基因慢病毒修飾對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)凋亡的作用。方法設(shè)計(jì)并合成人PERK基因的上、下游引物,采用PCR方法從真核質(zhì)粒pcDNA3.l(-)-PERK中擴(kuò)增目的基因。鑒定后與慢病毒載體pWPT-GFP進(jìn)行重組,再將重組慢病毒載體pWPT-GFP-PERK與慢病毒包裝質(zhì)粒pMD2G、pSPAX2共轉(zhuǎn)入293T細(xì)胞中,進(jìn)一步包裝形成PERK慢病毒(LV-PERK);收集轉(zhuǎn)染后48h的細(xì)胞上清,體外感染成肌細(xì)胞C2C12,觀察綠色熒光蛋白(GFP)感染效率,并應(yīng)用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí)重組慢病毒PERK對(duì)C2C12細(xì)胞增殖凋亡的影響,蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Cleaved Caspase-3與Chop蛋白的表達(dá)。結(jié)果成功構(gòu)建和包裝了滴度為4.2×108 efu/mL的PERK重組慢病毒。FCM檢測(cè)結(jié)果表明,TM+LV-PERK處理組G1期細(xì)胞比例為54.37%,低于TM組(77.91%)和LV-GFP組(66.41%);TM+LVPERK處理組S期細(xì)胞比例為31.36%,高于TM組(12.14%)和LV-GFP組(16.96%),各組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);此外,TM+LV-PERK處理組細(xì)胞凋亡率為25.91%,高于TM組(11.79%)和Ad-GFP組(11.24%),各組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。免疫印跡檢測(cè)Cleaved Caspase-3和Chop蛋白的表達(dá)與FCM結(jié)果一致。結(jié)論成功構(gòu)建和包裝LVPERK重組慢病毒顆粒,在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時(shí),LV-PERK慢病毒可促進(jìn)C2C12細(xì)胞的增殖和凋亡。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)及遺傳學(xué)教研室;重慶醫(yī)科大學(xué)發(fā)育生物學(xué)與模式動(dòng)物平臺(tái);
【關(guān)鍵詞】： PERK 慢病毒 成肌細(xì)胞 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 細(xì)胞凋亡
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81371928,81171697) 教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃(NCET-12-1090) 人力資源和社會(huì)保障部留學(xué)回國(guó)人員擇優(yōu)資助項(xiàng)目(2011-235)~~
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： Influence of lentivirus modification of human PERKgene on endoplasmic reticulum stress-mediated apoptosisZHANG Peng,XIA Fei,LI Mei-ling,HAN Xiao-feng,GUO Feng-jin*1.Department of Cell Biology and Genetics,Chongqing Medical University,Chongqing 400016,Chi

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前5條

1 武麗紅;王金河;王茜;賈懂懂;梁建琴;;Survivin shRNA重組慢病毒構(gòu)建及對(duì)A549細(xì)胞增殖的影響[J];中國(guó)肺癌雜志;2011年12期

2 龍曉蘭;周敏;石必枝;謝海龍;李宗海;;Cofilin-1慢病毒載體的構(gòu)建及其在Huh-7中的過(guò)表達(dá)[J];中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志;2012年01期

3 韓騰龍;王立峰;張t，

本文編號(hào)：517277