本文關(guān)鍵詞：尾靜脈放血對CUMS模型大鼠行為學和海馬NOS變化的影響

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【摘要】：研究目的：觀察尾靜脈放血對慢性不可預見性應激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)結(jié)合孤養(yǎng)抑郁模型大鼠行為學的影響,及其可能的一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)機制,推廣放血療法的臨床應用范圍,為抑郁癥患者提供新的治療方法。研究方法：健康雄性SD大鼠,適應性飼養(yǎng)一周后,根據(jù)開野實驗(open-field test,OFT)水平運動路程的結(jié)果選擇得分相近的動物33只納入實驗。用標記法隨機將大鼠分為正常組(n=10)和造模組(n=23),采用CUMS結(jié)合孤養(yǎng)21天建立抑郁模型大鼠,正常組不干預；將造模成功的20只按OFT水平運動路程分層隨機分為模型組和放血組,放血組尾靜脈放血(10滴,3次/周,共14天),不干預模型組。治療結(jié)束后,以O(shè)FT結(jié)果評價各組大鼠的行為學,采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應RT-PCR方法檢測各組大鼠海馬內(nèi)皮源型一氧化氮合酶(endothelial NOS, eNOS) mRNA、誘導源型一氧化氮合酶(inducible NOS, iNOS) mRNA、神經(jīng)源型一氧化氮合酶(neural NOS, nNOS) mRNA的表達結(jié)果,免疫組織化學方法(immunohistochemistry, IHC)和免疫印跡(Western Blot, WB)方法檢測各合酶蛋白表達水平：IHC觀察陽性沉積物的分布和所檢查指標的表達面積及平均光密度,用WB觀察各合酶電泳條帶寬度,并對其灰度值進行分析。研究結(jié)果：1.造模后行為學檢測：與正常組相比,造模組水平運動路程、垂直運動次數(shù)、向中心探索次數(shù)和理毛次數(shù)顯著減少(P0.01),大便粒數(shù)與正常組比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。提示CUMS結(jié)合孤養(yǎng)可以成功復制抑郁模型大鼠。2.治療后行為學檢測：與正常組比較,模型組水平運動路程、垂直運動次數(shù)、向中心探索次數(shù)和理毛次數(shù)均減少(P0.01),放血組理毛次數(shù)下降(P0.05)；與模型組比較,放血組的水平運動距離、垂直運動次數(shù)及向中心探索次數(shù)均升高(P0.05)；各組間大便粒數(shù)差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。提示放血療法可以改善CUMS模型大鼠的行為學。3.各組大鼠海馬NOS表達測定：1) eNOS RT-PCR檢測：模型組大鼠海馬eNOS mRNA較正常組下降,放血使之升高；IHC檢測：與正常組eNOS的表達面積和平均光密度相比,模型組和放血組大鼠海馬eNOS明顯降低(P0.01),且與模型組相比,放血組大鼠有所回升,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)；WB檢測：與正常組相比,模型組和放血組大鼠海馬eNOS/GAPDH的灰度值均下降(P0.05),但放血組eNOS/GAPDH陽性表達值降低幅度較模型組小,兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.01)。提示尾靜脈放血可以使CUMS模型大鼠海馬eNOS陽性表達升高,但升高后水平仍不及正常組。2) iNOS RT-PCR檢測：模型組大鼠海馬iNOS mRNA較正常組升高,放血使之降低；IHC檢測：與正常組iNOS的表達面積和平均光密度相比,模型組大鼠海馬iNOS表達升高(P0.001),放血組亦升高(P0.05),但升高幅度不及模型組(P0.001)；WB檢測：模型組的iNOS/GAPDH陽性表達值顯著高于正常組(P0.01),放血組一定程度上降低了抑郁模型大鼠海馬iNOS的含量,與模型組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),放血組降低后的iNOS蛋白表達較正常組增加(P0.05)。提示尾靜脈放血可以降低CUMS模型大鼠海馬iNOS表達,但降低后的iNOS水平仍較正常組高。3) nNOS RT-PCR檢測：結(jié)果與eNOS mRNA表達相一致；IHC檢測：模型組和放血組大鼠nNOS的表達面積和平均光密度較正常組減少(P0.001),模型組和放血組間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)；WB檢測：與正常組比較,抑郁模型大鼠海馬nNOS/GAPDH陽性表達值下降(P0.001),而放血組的灰度值較模型組升高,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01),正常組與放血組差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。提示尾靜脈放血可以升高CUMS模型大鼠海馬nNOS的陽性表達。結(jié)論：1. CUMS結(jié)合孤養(yǎng)可以成功建立抑郁動物模型,減少大鼠水平運動距離、垂直運動次數(shù)及向中心探索次數(shù),尾靜脈放血有效改善CUMS模型大鼠的行為學,增加該大鼠模型在開野實驗中的運動和探索能力。2. CUMS結(jié)合孤養(yǎng)致大鼠抑郁樣行為改變與海馬內(nèi)NOS水平相關(guān)：CUMS模型大鼠海馬內(nèi)eNOS、nNOS的表達下降,iNOS表達上升,尾靜脈放血可能通過升高eNOS、nNOS的含量,降低iNOS的水平,從而發(fā)揮抗抑郁作用。
【關(guān)鍵詞】：尾靜脈放血 抑郁癥 eNOS iNOS nNOS
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R245;R-332
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-13
• 第一部分 理論研究13-20
• 1. “氣機郁滯”是抑郁癥發(fā)生的核心病機13-14
• 1.1 從“氣機”探討抑郁癥成因13
• 1.2 從“情志”探討抑郁癥發(fā)生13
• 1.3 臟腑功能與抑郁癥的相關(guān)性13-14
• 2. 氣體信號分子與抑郁癥之間的相關(guān)性研究14-15
• 2.1 一氧化氮(NO)與抑郁癥14
• 2.2 一氧化碳(CO)與抑郁癥14
• 2.3 硫化氫(H2S)與抑郁癥14-15
• 3. 中醫(yī)學“氣”、“血”與氣體信號分子的關(guān)系探討15
• 3.1 “氣”與氣體信號分子15
• 3.2 “氣”與“血”15
• 3.3 氣體信號分子與“血”15
• 4. 放血療法在情志病中的應用研究15-16
• 5. 放血療法的中醫(yī)治療原則與現(xiàn)代醫(yī)學作用機制16-20
• 5.1 放血療法的中醫(yī)治療原則16-17
• 5.2 放血療法的現(xiàn)代醫(yī)學研究作用機理17-20
• 第二部分 實驗研究20-33
• 1. 實驗材料與儀器20
• 1.1 實驗動物20
• 1.2 主要儀器與設(shè)備20
• 1.3 主要試劑與耗材20
• 2. 實驗方法20-27
• 2.1 分組與CUMS結(jié)合孤養(yǎng)抑郁模型的建立20-22
• 2.2 治療方法22
• 2.3 Open-field test行為學檢測22
• 2.4 取材22
• 2.5 觀察指標及檢測方法22-26
• 2.6 統(tǒng)計學處理和分析26-27
• 3. 實驗結(jié)果27-33
• 3.1 造模結(jié)束開野實驗結(jié)果27
• 3.2 治療后開野實驗結(jié)果27-28
• 3.3 NOS表達測定28-33
• 第三部分 討論33-38
• 1. 應激致抑郁樣行為改變33
• 2. 放血改善CUMS模型大鼠行為學33-34
• 3. CUMS結(jié)合孤養(yǎng)致大鼠抑郁樣行為學改變與NOS變化的相關(guān)性34-36
• 3.1 應激致抑郁樣行為改變與eNOS34-35
• 3.2 應激致抑郁樣行為改變與iNOS35
• 3.3 應激致抑郁樣行為改變與nNOS35-36
• 4. 放血通過調(diào)節(jié)海馬內(nèi)NOS水平改善大鼠抑郁樣行為36
• 5. 結(jié)論36
• 6. 不足和展望36-38
• 參考文獻38-45
• 攻讀碩士期間取得的學術(shù)成果45-46
• 致謝46

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