本文關(guān)鍵詞：黃芩素逆轉(zhuǎn)阿爾茨海默病模型小鼠突觸可塑性與認(rèn)知損害，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:越來(lái)越多的證據(jù)表明阿爾茨海默病的突觸功能異常與認(rèn)知損害程度密切相關(guān),課題組既往研究發(fā)現(xiàn)黃芩素提高正常海馬腦片NMDAR依賴的LTP,考慮到黃芩素具有多種生物學(xué)效應(yīng),尤其是逆轉(zhuǎn)突觸可塑性和認(rèn)知損害方面,我們將研究黃芩素是否改善AD相關(guān)的突觸功能損害。方法:5月齡雄性APP/PS1轉(zhuǎn)基因鼠,和性別、年齡相匹配的野生型WT小鼠分別隨機(jī)給予含有黃芩素的飲用水口服,2個(gè)月后評(píng)估小鼠認(rèn)知功能和AD相關(guān)的病理改變。小鼠的學(xué)習(xí)與記憶功能由相關(guān)行為學(xué)檢測(cè),如:Morris水迷宮、條件性恐懼和新物體認(rèn)知實(shí)驗(yàn);Western blot檢測(cè)海馬磷酸化Akt、磷酸化糖原合酶3β活性形式(GSK3β-Tyr-216)和抑制形式(GSK3β-Ser-9)、γ-分泌酶(BACE1)等的變化。Aβ40或Aβ42酶聯(lián)免疫吸附試劑盒檢測(cè)海馬Aβ含量。場(chǎng)電生理技術(shù)研究海馬schaffer側(cè)支-CA1區(qū)的TBS-或HFS-LTP變化。Golgi-cox染色觀察海馬CA1區(qū)和皮層錐體神經(jīng)元樹突棘密度變化。結(jié)果:與WT組相比,APP/PS1鼠海馬組織p-Akt水平明顯減低(P0.05),而黃芩素處理APP/PS1鼠可明顯提高其磷酸化水平(P0.05)。各實(shí)驗(yàn)組總Akt蛋白水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。與WT組相比,APP/PS1鼠GSK3β抑制形式p-GSK3β-Ser9表達(dá)減低(P0.05),而黃芩素處理明顯提高其表達(dá)(P0.05)。而相對(duì)的是,黃芩素處理明顯降低APP/PS1鼠海馬GSK3β激活形式p-SK3β-Tyr216(P0.05)。四個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間總GSK3β蛋白表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。與WT組相比,APP/PS1鼠BACE1蛋白水平明顯增高(P0.05),而黃芩素處理明顯逆轉(zhuǎn)其改變(P0.05)。黃芩素處理可同時(shí)降低海馬組織Aβ40和Aβ42含量(P0.05)。與WT組相比,APP/PS1鼠海馬CA1區(qū)LTP受損(LTP由TBS刺激誘導(dǎo))(P0.05),而黃芩素處理逆轉(zhuǎn)APP/PS1鼠LTP損害(P0.05)。為進(jìn)一步證實(shí)黃芩素可逆轉(zhuǎn)APP/PS1鼠海馬CA1區(qū)的LTP損害,我們采用HFS誘導(dǎo)的LTP研究黃芩素的作用,如上相似的結(jié)果,黃芩素逆轉(zhuǎn)APP/PS1鼠海馬的LTP損害(P0.05)。黃芩素處理可提高APP/PS1鼠海馬部位突觸蛋白的表達(dá)水平(P0.05)。黃芩素可提高APP/PS1鼠樹突棘密度(P0.05)。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn):與WT組相比,APP/PS1鼠尋找隱藏平臺(tái)的潛伏期較長(zhǎng)(P0.05),而高劑量的黃芩素處理明顯縮短APP/PS1鼠的潛伏期(P0.05)。雙向方差分析游泳距離(實(shí)驗(yàn)組和訓(xùn)練天數(shù))示:訓(xùn)練天數(shù)主效應(yīng)(F(4,252)=38.87,P0.05),實(shí)驗(yàn)組主效應(yīng)(F(5,65)=2.34,P0.05),交互作用(F(20,252)=1.58,P0.05)。探索實(shí)驗(yàn)中,高劑量黃芩素APP/PS1組目標(biāo)象限時(shí)間比比APP/PS1組明顯增多(P0.05)。條件性恐懼實(shí)驗(yàn):與APP/PS1組相比,高劑量黃芩素APP/PS1組海馬依賴的僵立時(shí)間比明顯增高,約至WT組水平(P0.05)。聽(tīng)覺(jué)依賴的條件性恐懼僵立時(shí)間比各實(shí)驗(yàn)組無(wú)顯著差異(P0.05)。曠場(chǎng)試驗(yàn)檢測(cè)小鼠自發(fā)活動(dòng),各實(shí)驗(yàn)組總運(yùn)動(dòng)路程無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。痛閾實(shí)驗(yàn)中,各實(shí)驗(yàn)組小鼠達(dá)到畏懼或退縮的電刺激強(qiáng)度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。新物體認(rèn)知實(shí)驗(yàn):與WT組相比,APP/PS1鼠辨別率明顯降低(P0.05),而高劑量黃芩素逆轉(zhuǎn)辨別率至WT組水平(P0.05)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)結(jié)合行為學(xué)、場(chǎng)電位電生理記錄和分子生物學(xué)等相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)發(fā)現(xiàn):慢性口服黃芩素提高APP/PS1鼠海馬Akt磷酸化水平,降低GSK3β和BACE1活性,降低腦內(nèi)Aβ含量,逆轉(zhuǎn)突觸可塑性和相關(guān)認(rèn)知損害。黃芩素可能是種新型的、有前景的口服藥物治療阿爾茨海默病。
【關(guān)鍵詞】：黃芩素 阿爾茨海默病 突觸可塑性 認(rèn)知功能
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-11
• 第1章 前言11-15
• 第2章 材料與方法15-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 2.2 藥品15
• 2.3 實(shí)驗(yàn)分組15-16
• 2.3.1 篩選有效劑量實(shí)驗(yàn)分組15-16
• 2.3.2 機(jī)制研究實(shí)驗(yàn)分組16
• 2.4 主要試劑16-17
• 2.5 主要儀器17
• 2.6 Western blot17-20
• 2.6.1 樣品的蛋白質(zhì)制備17-18
• 2.6.2 BCA法蛋白濃度定量18
• 2.6.3 Western blot溶液配制18-19
• 2.6.4 電泳膠的配制:19
• 2.6.5 Western blot具體步驟：19-20
• 2.7 小鼠海馬腦片的制備與電生理記錄20-21
• 2.7.1 人工腦脊液的配制20
• 2.7.2 腦片的制備20
• 2.7.3 刺激電極和記錄電極的制作20
• 2.7.4 場(chǎng)電位的記錄20-21
• 2.8 Golgi-cox染色21-23
• 2.8.1 配置golgi-cox溶液21-22
• 2.8.2 灌注與固定22
• 2.8.3 沉糖22
• 2.8.4 切片22
• 2.8.5 呈色22-23
• 2.9 Aβ40與Aβ42 ELISA檢測(cè)23-24
• 2.10 行為學(xué)實(shí)驗(yàn)24-26
• 2.10.1 曠場(chǎng)試驗(yàn)24
• 2.10.2 痛閾試驗(yàn)24
• 2.10.3 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)24-25
• 2.10.4 條件性恐懼實(shí)驗(yàn)25-26
• 2.10.5 新物體認(rèn)知實(shí)驗(yàn)26
• 2.11 統(tǒng)計(jì)分析26-27
• 第3章 結(jié)果27-35
• 3.1 黃芩素提高APP/PS1鼠海馬Akt磷酸化水平和抑制GSK3β 活性27
• 3.2 黃芩素抑制APP/PS1鼠BACE1活性和減少Aβ 含量27-28
• 3.3 黃芩素逆轉(zhuǎn)APP/PS1鼠海馬LTP損害28-30
• 3.4 黃芩素提高APP/PS1鼠海馬和皮層樹突棘密度30-31
• 3.5 黃芩素改善APP/PS1鼠學(xué)習(xí)與記憶能力31-35
• 第4章 討論35-39
• 4.1 黃芩素調(diào)控Akt/ GSK3β 通路抑制BACE1水平35-37
• 4.2 黃芩素逆轉(zhuǎn)海馬CA1區(qū)LTP37
• 4.3 黃芩素提高海馬CA1區(qū)錐體神經(jīng)元樹突棘密度37
• 4.4 黃芩素逆轉(zhuǎn)海馬依賴的學(xué)習(xí)與記憶能力37-39
• 第5章 結(jié)論39-40
• 致謝40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果44-45
• 綜述45-51
• 參考文獻(xiàn)49-51

【引證文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 姚辛敏;周妍妍;李新新;周佳;王琪;劉雅芳;;中藥單體及其有效成分經(jīng)BACE1途徑防治阿爾茨海默氏病實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J];中醫(yī)藥學(xué)報(bào);2016年06期

  本文關(guān)鍵詞：黃芩素逆轉(zhuǎn)阿爾茨海默病模型小鼠突觸可塑性與認(rèn)知損害，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：510035