本文關鍵詞：人PSMP重組蛋白在CHO細胞中表達、純化及功能鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:構建新的具有趨化作用的人類細胞因子PSMP的真核表達載體,在倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary,CHO)中表達并純化,為PSMP的功能機制研究奠定基礎。方法:從pcDNA3.1-PSMP-myc/His中切下PSMPmyc/His片段,插入pMH3表達載體。利用電穿孔法將該表達載體轉染CHO細胞,G418抗性篩選穩(wěn)定克隆株。以Dot blot及Western blot法檢測上清液中PSMP蛋白的表達,利用有限稀釋法對抗性篩選出的混合克隆單克隆化,懸浮無血清大批培養(yǎng)工程細胞,通過鎳親和層析法純化蛋白,SDS-PAGE電泳分析蛋白純度,Boyden小室體外趨化實驗分析蛋白功能活性。結果:PSMP-myc/His基因插入pMH3載體后成功構建真核表達載體pMH3-PSMP,轉染CHO細胞后經(jīng)2次克隆化獲得穩(wěn)定表達PSMP的基因工程細胞株。鎳親和層析純化的重組蛋白PSMP純度達95%以上且具有生物學活性。結論:成功構建了PSMP蛋白的真核表達載體,并獲得其穩(wěn)定表達的CHO細胞株,獲得了較高純度的、具有生物學活性的重組蛋白,為下一步PSMP功能和機制研究提供有用工具。
【作者單位】： 北京大學基礎醫(yī)學院免疫學系;北京大學人類疾病基因研究中心 衛(wèi)生部醫(yī)學免疫學重點實驗室;
【關鍵詞】： PC-分泌微量蛋白 人 CHO細胞 遺傳 重組 基因表達 分離和提純
【基金】：國家教育部博士點基金(20120001110001) 國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(2011ZX09506-005) 國家自然科學基金(31270915)資助~~
【分類號】：R392.12
【正文快照】： 趨化因子是一類具有趨化活性、相對分子質量在8×103~10×103的分泌性細胞因子。至今發(fā)現(xiàn)約50種人的趨化因子,屬細胞因子中的最大家族[1-3]。趨化因子超家族成員具有一定的同源結構,根據(jù)一級結構中保守的2~8個Cys的前2個Cys的排列方式,可將趨化因子超家族分為CXC(α)、CC(β)

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉冬梅;王曉非;;EGCG對ConA誘導的肝損傷小鼠NF-κB和ICAM-1表達的影響[J];解剖學研究;2014年01期

2 韓銳;綦輝;孫琳;申阿東;;CCR2、CCL5、CCR5和CCL1基因多態(tài)性與中國漢族兒童結核病易感性的關聯(lián)研究[J];標記免疫分析與臨床;2014年02期

3 王智權;李軼女;張志芳;易詠竹;吳潤;;用桿狀病毒表達載體在家蠶中表達犬γ干擾素及產(chǎn)物的抗病毒活性[J];蠶業(yè)科學;2014年03期

4 武發(fā)菊;劉萍;安芳蘭;董文教;宋玉霞;董金杰;牟克斌;王超英;劉學榮;;BHK-21懸浮細胞流加培養(yǎng)的研究[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年06期

5 李曉璐;范里;趙亮;陳飛;譚文松;;基于單純型設計和部件搜索方法的CHO細胞無血清培養(yǎng)基的高通量優(yōu)化[J];高�；瘜W工程學報;2014年04期

6 魏韜;王菡;代海兵;;外源蛋白在CHO細胞株中高效表達的策略[J];黑龍江醫(yī)藥;2011年04期

7 沈e，

本文編號：498422