本文關(guān)鍵詞：S100A9蛋白單克隆抗體的制備及初步鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的制備S100A9重組蛋白及其單克隆抗體(mAb),并對抗體進(jìn)行特異性鑒定。方法以成人肝cDNA表達(dá)文庫為模板,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pGEX-4T-1-S100A9和pET-32a-S100A9。融合蛋白在大腸桿菌中表達(dá),純化后以His-S100A9作為免疫原制備鼠mAb。采用ELISA和Western blot法鑒定篩選抗體。挑取雜交瘤細(xì)胞株制備腹水并純化,采用Western blot法和間接免疫熒光染色鑒定mAb的特異性。結(jié)果 GST-S100A9和His-S100A9融合蛋白均成功構(gòu)建表達(dá)。共篩選到抗S100A9雜交瘤細(xì)胞18株,其中15株在Western blot檢測中與重組蛋白呈強(qiáng)陽性反應(yīng),3株呈弱陽性反應(yīng)。2株可識別肝癌組織間隙液中的S100A9天然蛋白。結(jié)論成功地制備出多株抗S100A9的mAb。
【作者單位】： 蛋白質(zhì)組學(xué)國家重點實驗室 北京蛋白質(zhì)組研究中心抗體工程研究室;
【關(guān)鍵詞】： SA 單克隆抗體 雜交瘤 細(xì)胞融合
【基金】：國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(973)(2011CB915502) 國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(863)(2012AA020201) 蛋白質(zhì)組學(xué)國家重點實驗室(SKLP Y200907)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： S100蛋白家族是一個由20多個相對分子質(zhì)量(Mr)9 000～13 000蛋白組成的鈣結(jié)合蛋白家族[1]。S100A9又稱鈣粒蛋白B(calgranulin B)或遷移抑制因子相關(guān)蛋白14(migration inhibitory factor-relatedprotein 14,MRP14)是S100蛋白家族中的一員,在體內(nèi)循環(huán)的粒細(xì)胞和單核細(xì)胞中高表達(dá)

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本文編號：490685