本文關(guān)鍵詞：腦膜炎球菌多糖蛋白結(jié)合疫苗中A群游離多糖含量測定方法的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立腦膜炎球菌結(jié)合疫苗中A群游離多糖含量的定量檢測方法,并進行驗證。方法采用高效陰離子色譜-電導法(high-performance anion-exchange chromatography with conductivity detection,HPAEC-CD),分析柱:IonPacTMAS11 Analytical(4 mm×250 mm),22 mmol/L Na OH流洗,流速為1 ml/min,25μl自動進樣,電導檢測。篩選樣品的氧化反應最佳溫度、雙氧水濃度及干烤時間,確定HPAEC-CD的檢測限和定量限,并進行專屬性、準確性及精密度驗證。應用建立的方法檢測3批多糖蛋白結(jié)合物原液A-破傷風類毒素(A-tetanus toxoid,A-TT)多糖及游離多糖含量,并與《中國藥典》三部(2010版)附錄ⅦA磷測定法中的傳統(tǒng)比色法進行比較;同時檢測3批A、C群及A、C、W135、Y群腦膜炎球菌多糖蛋白結(jié)合疫苗的多糖及游離多糖含量。結(jié)果確定樣品的氧化條件為:100μl/ml H2O2,220℃干烤90 min。磷標準品在0.1~1μg/ml范圍內(nèi),峰面積和濃度線性關(guān)系良好(r=0.999 877);TT、C-TT、W-TT及Y-TT對測定無干擾;該方法的檢測限為0.007μg/ml,定量限為0.024μg/ml;A群腦膜炎球菌多糖原液的加樣回收率在97.56%~102.95%之間;重復性及不同操作者間的精密度試驗結(jié)果 RSD均小于5%。A-TT的多糖含量及游離多糖含量與傳統(tǒng)比色法測定結(jié)果差異較小;3批A、C群及A、C、W135、Y群腦膜炎球菌多糖蛋白結(jié)合疫苗的多糖含量均符合《A、C群腦膜炎球菌結(jié)合疫苗制造及檢定規(guī)程草案》及《A、C、W135、Y群腦膜炎球菌結(jié)合疫苗制造及檢定規(guī)程草案》要求,游離多糖含量分別為24.31%、23.04%、24.44%和19.07%、17.80%、19.46%。結(jié)論采用H2O2氧化處理,HPAEC-CD檢測,除了能對腦膜炎球菌多糖蛋白結(jié)合疫苗中微量A群多糖含量進行定量檢測外,還能夠進行游離多糖含量的檢測。該方法靈敏度和精密度良好,操作簡單、安全,對操作者及環(huán)境提供了保護。
【作者單位】： 北京微谷生物醫(yī)藥有限公司;北京生物制品研究所有限責任公司;
【關(guān)鍵詞】： 過氧化氫 高效陰離子色譜-電導法 腦膜炎奈瑟菌 結(jié)合疫苗 多糖 含量測定
【基金】：重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(2010ZX09401-303-308)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 與腦膜炎球菌多糖疫苗相比,結(jié)合疫苗的多糖劑量較低[1],而未與載體蛋白結(jié)合的游離多糖含量是評價結(jié)合疫苗的一項重要指標,其含量不應超過總多糖含量的20%。這使微量多糖含量的測定成為首要解決的任務。采用WHO推薦使用的高效陰離子-液相脈沖安培檢測法,即高效陰離子色譜-電導

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本文編號：486170