本文關(guān)鍵詞：人不同孕期胎盤組織中實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因的選擇，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的比較人不同孕期胎盤組織中最常用的內(nèi)參基因及其他幾種管家基因mRNA表達(dá)水平的差異及穩(wěn)定性,選出用于該研究的最佳內(nèi)參基因。方法應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)6種管家基因[3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)、β肌動(dòng)蛋白(β-actin)、β2微球蛋白(β2-M)、18S核糖體RNA(18srRNA)、RNA聚合酶Ⅱ(RPⅡ)、泛素(UBC)]在早、中、晚不同孕期孕婦絨毛和胎盤組織中mRNA的表達(dá)情況,并應(yīng)用geNorm程序?qū)?nèi)參基因表達(dá)穩(wěn)定性進(jìn)行分析。結(jié)果在早、中、晚不同孕期的孕婦早孕絨毛或胎盤組織中內(nèi)參基因GAPDH mRNA的表達(dá)水平變化最大,其中在早孕絨毛組織中表達(dá)水平最高,隨著孕期的延長(zhǎng)其表達(dá)水平逐漸降低;內(nèi)參基因β-actin mRNA轉(zhuǎn)錄水平則呈相反的趨勢(shì)變化,標(biāo)本間mRNA表達(dá)水平變化亦較大;內(nèi)參基因β2-M、18S和UBC mRNA表達(dá)水平在不同孕期標(biāo)本間變化相對(duì)較小,其中內(nèi)參基因RPⅡmRNA表達(dá)水平在不同孕期標(biāo)本間變化最小。所選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定度由高到低依次為RPⅡUBC18srRNAβ2-Mβ-actinGAPDH。結(jié)論在應(yīng)用熒光實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)研究基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)時(shí),應(yīng)根據(jù)研究所用的材料選擇合適的內(nèi)參基因;本研究中RPⅡ是可用的穩(wěn)定內(nèi)參基因。
【作者單位】： 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院血液科;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院環(huán)境與疾病相關(guān)基因教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院長(zhǎng)安區(qū)醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 實(shí)時(shí)定量PCR 內(nèi)參基因 GeNorm程序分析 不同孕期 胎盤組織
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.30800909)~~
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(QPCR)是近年來(lái)最常用的快速、準(zhǔn)確定量檢測(cè)低豐度mRNA的敏感方法。使用內(nèi)源性管家基因(housekeeping gene)作為內(nèi)參照物進(jìn)行校正和標(biāo)準(zhǔn)化,以去除不同標(biāo)本在RNA的產(chǎn)量、質(zhì)量以及逆轉(zhuǎn)錄效率上可能存在的差別而獲得目標(biāo)基因特異性表達(dá)的真正差異,是QPCR中常采用

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