本文關(guān)鍵詞：HSV-1衣被蛋白UL7基因的克隆及其在病毒增殖中的表達(dá)分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：單純皰疹病毒(Herpes simplex virus, HSV)是一種危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)病原體,分為HSV-1和HSV-2兩種血清型。病毒通過(guò)受損皮膚或黏膜感染宿主細(xì)胞,在宿主的上皮組織內(nèi)生長(zhǎng)增殖,另一方面,病毒也能進(jìn)一步從感染的上皮組織的神經(jīng)末梢入侵到神經(jīng)元,在初次感染后于三叉神經(jīng)節(jié)、背根神經(jīng)節(jié)等處建立潛伏性感染,并伴隨宿主終生。其中,單純皰疹病毒Ⅰ型(Herpes simplex virus Ⅰ, HSV-1)可引起人皮膚、黏膜和神經(jīng)系統(tǒng)感染,能導(dǎo)致角膜炎、皰疹性腦炎、唇皰疹和齦口炎等疾病。衣被蛋白(也稱(chēng)間層蛋白,tegument protein)在成熟的皰疹病毒顆粒中既以結(jié)構(gòu)蛋白的形式存在,又在病毒的增殖過(guò)程中發(fā)揮著特定的生物學(xué)作用。UL7是HSV-1型皰疹病毒衣被蛋白的編碼基因之一,目前國(guó)內(nèi)外對(duì)其編碼的蛋白進(jìn)行的研究還不夠深入,文獻(xiàn)中都報(bào)道較少。但是有研究證實(shí),UL7編碼基因在皰疹病毒間是高度保守的,作為HSV-1 UL7基因的同源基因,牛皰疹病毒1型(Bovine herpes virus 1, BHV-1)和偽狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)的UL7突變株在細(xì)胞中的復(fù)制能力受損,只是對(duì)其具體機(jī)制還不是很了解。同時(shí)也有實(shí)驗(yàn)表明,HSV-1型皰疹病毒的UL7與UL51通過(guò)相互作用,參與病毒感染細(xì)胞的過(guò)程。基于對(duì)UL7蛋白的初步了解,為了更加系統(tǒng)地研究UL7蛋白在HSV-1型皰疹病毒增殖過(guò)程中的功能意義,本課題做了以下工作：提取了HSV-1的基因組,并用PCR方法擴(kuò)增了UL7基因片段,構(gòu)建原核表達(dá)質(zhì)粒pGEX-5X-1-UL7,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21(DE3)中,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),獲得并純化GST-UL7重組蛋白,將其作為抗原免疫ICR小鼠制備抗UL7多克隆抗體。用間接法ELISA檢測(cè)抗體的效價(jià),Western Blot檢測(cè)抗體的特異性,并使用該多克隆抗體對(duì)HSV-1病毒感染Vero細(xì)胞后的各時(shí)間點(diǎn)UL7蛋白表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,GST-UL7重組蛋白在大腸桿菌BL21(DE3)中高效表達(dá),間接法ELISA檢測(cè)抗UL7抗體效價(jià)可達(dá)1：163840以上。Western Blot實(shí)驗(yàn)證明抗UL7多克隆抗體可以特異性識(shí)別UL7蛋白。在HSV-1病毒感染Vero細(xì)胞后的各時(shí)間點(diǎn)均檢測(cè)到UL7蛋白的表達(dá)。通過(guò)成功獲得GST-UL7融合蛋白,并制備了抗UL7蛋白的多克隆抗體,利用該抗體我們初步確定了UL7蛋白在HSV-1增殖過(guò)程中呈持續(xù)性表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-1) UL7 衣被蛋白 原核表達(dá) 多克隆抗體
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R373
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-15
• 1 皰疹病毒的基本生物學(xué)特征7-8
• 2 HSV-1的感染與臨床癥狀8-11
• 3 HSV-1的治療11
• 4 HSV-1病毒的基因結(jié)構(gòu)及其生物學(xué)性狀11-12
• 5 HSV-1的衣被蛋白12-15
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法15-37
• 1 實(shí)驗(yàn)材料15-18
• 2 實(shí)驗(yàn)方法18-37
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析37-43
• 1 HSV-18F株的基本特性37
• 2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建37-38
• 3 UL7蛋白在原核細(xì)胞中的表達(dá)與純化38-41
• 4 抗UL7蛋白多克隆抗體的制備及特異性鑒定41
• 5 核質(zhì)分離效果的鑒定41-42
• 6 抗UL7蛋白抗體應(yīng)用于HSV-1病毒中UL7蛋白的檢測(cè)42-43
• 討論43-46
• 小結(jié)46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 附錄51-61
• 附錄1 主要縮略詞表51-52
• 附錄2 論文所用序列52-53
• 附錄3 主要溶液配制表53-57
• 附錄4 測(cè)序峰形圖57-59
• 附錄5 蛋白質(zhì)譜鑒定結(jié)果59-61
• 致謝61-62
• 研究生簡(jiǎn)歷62-63

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：468470