本文關(guān)鍵詞：分枝桿菌同源重組系統(tǒng)的構(gòu)建及應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：分枝桿菌屬包括致病性結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)分枝桿菌,目前仍然是人類健康的巨大威脅。分枝桿菌的科學(xué)研究都需要有效的分子遺傳操作技術(shù),尤其是快速有效的基因突變及基因敲除的分子操作技術(shù)。但是由于分枝桿菌生長緩慢、重組酶活性較低等原因,在分枝桿菌內(nèi)的基因操作技術(shù)包括基因敲除技術(shù)的發(fā)展一直落后于其他模式生物。我們?cè)赬er/dif敲除系統(tǒng)的基礎(chǔ)上開發(fā)了一種高效、通用、完善的基因敲除系統(tǒng)。我們?cè)趐JV53質(zhì)粒中引入gfp報(bào)告基因,用于快速篩選在重組后丟失的質(zhì)粒；構(gòu)建了dif-hyg-dif, dif-zeo-dif表達(dá)盒,在表達(dá)盒兩邊加了多克隆酶切位點(diǎn)便于上下游同源臂的插入；隨后我們利用該系統(tǒng)對(duì)恥垢分枝桿菌的4對(duì)毒素-抗毒素基因進(jìn)行了連續(xù)的讀碼框內(nèi)敲除,表明該系統(tǒng)可成功用于分枝桿菌多基因的連續(xù)敲除,為分枝桿菌功能基因組的研究提供了新的遺傳工具。我們對(duì)結(jié)核分枝桿菌中的毒素-抗毒素系統(tǒng)進(jìn)行了初步的研究,新發(fā)現(xiàn)了6個(gè)在恥垢分枝桿菌中有功能的毒素-抗毒素基因。此外,我們發(fā)現(xiàn)12個(gè)毒素-抗毒素基因在恥垢分枝桿菌中具有穩(wěn)定質(zhì)粒的功能,這說明它們可能參與調(diào)控結(jié)核分枝桿菌基因組的穩(wěn)定。該研究為進(jìn)一步研究毒素-抗毒素系統(tǒng)在結(jié)核分枝桿菌中的功能打下基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：分枝桿菌 基因敲除 毒素-抗毒素系統(tǒng)
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R378.91
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-7
• 第一章 分枝桿菌基因敲除工具的構(gòu)建和應(yīng)用7-31
• 前言7-10
• 1.1 材料和方法10-23
• 1.2 結(jié)果和分析23-29
• 1.3 討論29-31
• 第二章 結(jié)核分枝桿菌毒素-抗毒素(toxin-antitoxin)TA系統(tǒng)的研究31-45
• 前言31-35
• 2.1 材料和方法35-40
• 2.2 結(jié)果和分析40-44
• 2.3 討論44-45
• 總結(jié)和展望45-47
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷52-53
• 致謝53

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本文編號(hào)：463456