本文關(guān)鍵詞：microRNA原位雜交技術(shù)影響因素的探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討miRNA原位雜交技術(shù)的多種影響因素,以完善miRNA原位雜交分析方法。方法選擇不同組織來源、保存時(shí)間、切片厚度的常規(guī)病理組織切片進(jìn)行U6探針的原位雜交分析;選擇不同濃度的蛋白酶K對(duì)組織切片與MDA-MB-231爬片細(xì)胞進(jìn)行U6探針的原位雜交分析;實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法和爬片細(xì)胞原位雜交對(duì)BT549、T47D細(xì)胞株進(jìn)行miR-375的表達(dá)分析。結(jié)果不同組織來源、保存時(shí)間、切片厚度的石蠟標(biāo)本均能顯示細(xì)胞核內(nèi)的U6表達(dá);組織切片原位雜交實(shí)驗(yàn)中,乳腺組織切片20μg/ml的蛋白酶K作用組較其他組的原位雜交效果好;肝臟組織切片200μg/ml的蛋白酶K作用組的顯色最好;爬片細(xì)胞原位雜交實(shí)驗(yàn)中,2μg/ml的蛋白酶K作用組的顯色更深;U6與miR-375的原位雜交最適濃度分別為1ng/ml和100ng/ml;實(shí)時(shí)定量RT-PCR和爬片細(xì)胞原位雜交結(jié)果均顯示,BT-549的miR-375表達(dá)明顯低于T47D。結(jié)論 miRNA原位雜交操作能在常規(guī)固定并長(zhǎng)期保存的石蠟組織標(biāo)本上操作;蛋白酶K與探針的濃度應(yīng)當(dāng)依據(jù)病理標(biāo)本類型等多因素預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索;細(xì)胞水平的實(shí)時(shí)定量RT-PCR和爬片細(xì)胞原位雜交分析結(jié)果的比對(duì)為確定miRNA探針的特異性提供了幫助。
【作者單位】： 南昌大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)與分子生物學(xué)教研室;南昌大學(xué)附屬感染病醫(yī)院病理科;南昌大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： microRNA 原位雜交技術(shù) 影響因素
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助(30860319;81160248;81360313) 江西省自然科學(xué)青年基金資助(20142BAB215051) 江西省研究生創(chuàng)新專項(xiàng)資金資助(YC2013-S006)
【分類號(hào)】：R361
【正文快照】： Discussion on influence factors of microRNA in situ hybridizationLiu Zhuoqi 1,Yang Xiaohong1,Xiao Yingqun2,Huang Bo2,Zhang Ping2,Yang Xianhe2,Huang Yun3,Wang Weidong3,Wang Mengmeng1,Luo Daya1*(1 School of Basic Medical Sciences,Nanchang University,Nancha

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  本文關(guān)鍵詞：microRNA原位雜交技術(shù)影響因素的探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：460986