本文關(guān)鍵詞：pEGFP-C2-NLRC5重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其表達(dá)，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的構(gòu)建含NLRC5蛋白功能區(qū)的cDNA序列的真核表達(dá)載體pEGFP-C2-NLRC5,并檢測(cè)其在腎成纖維細(xì)胞(COS-7)中的表達(dá)。方法采用RT-PCR法從人肝星狀細(xì)胞(LX-2)中獲得NLRC5蛋白功能區(qū)的cDNA序列片段,用EcoRⅠ和BamHⅠ雙切酶將片段和載體pEGFP-C2雙酶切后,酶切產(chǎn)物加入T4連接酶16℃連接過(guò)夜,構(gòu)建真核表達(dá)載體pEGFP-C2-NLRC5。將構(gòu)建成功的pEGFP-C2-NLRC5重組質(zhì)粒經(jīng)PCR,限制性?xún)?nèi)切酶酶切和測(cè)序鑒定后用陽(yáng)離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000將其轉(zhuǎn)染至COS-7細(xì)胞,熒光顯微鏡下觀察綠色熒光蛋白表達(dá),Western blot法鑒定融合蛋白表達(dá)。結(jié)果陽(yáng)性克隆經(jīng)雙酶切法鑒定可見(jiàn)NLRC5基因片段。轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒后可觀察到綠色熒光蛋白的表達(dá),而且主要分布在細(xì)胞質(zhì)中,Western blot法也可檢測(cè)到在74 ku處有一明顯條帶,其大小符合EGFP-NLRC5表達(dá)的蛋白(NLRC5蛋白大小約為47 ku,EGFP蛋白大小約為27 ku),表明融合蛋白可在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中成功表達(dá)。結(jié)論成功構(gòu)建pEGFP-C2-NLRC5質(zhì)粒,NLRC5蛋白可在COS-7細(xì)胞中成功表達(dá)。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： NLRC COS- 基因表達(dá) 重組質(zhì)粒 轉(zhuǎn)染
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(編號(hào):81273526) 安徽省自然科學(xué)基金(編號(hào):KJ2010A178)
【分類(lèi)號(hào)】：R346
【正文快照】： 天然免疫系統(tǒng)中的核苷酸結(jié)合寡聚結(jié)構(gòu)域樣受體NOD樣受體(NOD-like receptor,NLR)家族成員之一——NLR家族含CARD結(jié)構(gòu)域5(NOD-like re-ceptor family CARD domain containing 5,NLRC5)蛋白分子,參與了對(duì)先天免疫核因子-κB(nuclear factorkappa B,NF-κB)信號(hào)通路中一種非常重

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【共引文獻(xiàn)】

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5 李麗s

本文編號(hào)：454604