本文關鍵詞：Reelin調(diào)節(jié)小鼠喙端遷移流發(fā)育的形態(tài)學研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：神經(jīng)干細胞指的是一類特定的干細胞,它具有自我更新能力,通過非對稱分裂方式產(chǎn)生其他細胞從而生成神經(jīng)組織。神經(jīng)干細胞的孵育成熟、遷移和分化與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育息息相關,對于理解神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、損傷及其修復機制至關重要。神經(jīng)干細胞的增殖、孵育成熟是個體生長發(fā)育的基礎;神經(jīng)干細胞的定向遷移是胚胎神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的先決條件,個體發(fā)育以及組織損傷修復都依賴于干細胞的定向遷移;細胞遷移到特定的部位受到一系列的分子信號的調(diào)控而后分化為特定的細胞發(fā)揮其功能,神經(jīng)干細胞的分化為個體不同器官的形成、發(fā)育及各個功能的完善提供了必要條件。目前已確定的細胞遷移方式有兩種:放射狀遷移和切線遷移。Doetsch認為喙端遷移流(Rostral Migratory Stream,RMS)是由室管膜下區(qū)(Subventricular Zone,SVZ)的遷移細胞從后至前貫穿于整個側腦室外側壁匯聚而成,RMS是SVZ神經(jīng)干細胞向嗅球部位遷移所經(jīng)過的高度受限通道。RMS作為細胞切線遷移的典型代表,是研究切線遷移的最佳模型。Reelin蛋白是細胞遷移起始與停止的調(diào)節(jié)信號,載脂蛋白E2受體(Apolipoprotein E Receptor 2,ApoER2)和極低密度脂蛋白受體(Very Low Density Lipoprotein Receptor,VLDLR)參與Reelin信號通路,Reelin蛋白與二者相結合,誘導胞內(nèi)效應器Dab1磷酸化,從而使遷移的細胞從其支架—放射狀膠質(zhì)細胞纖維上脫落,按照“inside-out”模式遷移定位,形成皮質(zhì)的六層結構。作為調(diào)節(jié)細胞遷移的重要信號,Reelin對神經(jīng)細胞遷移、皮質(zhì)片層化形成和大腦皮質(zhì)發(fā)育起著非常重要的作用。Reelin蛋白合成或分泌障礙甚至異常都將導致一系列的精神系統(tǒng)疾病,比如精神分裂癥、顳葉癲癇癥及自閉癥等等,因此了解Reelin對神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的影響有著一定的基礎意義,對精神系統(tǒng)疾病的治療有一定的臨床指導意義。長期以來,人們對Reelin信號通路在放射狀遷移中的作用進行了大量研究,但是Reelin信號通路在RMS發(fā)育中承擔的角色尚不清楚。因此,我們采用野生型(Wild Type,WT)小鼠和reeler小鼠作為實驗動物,應用免疫組織熒光技術、墨汁灌注技術及電鏡技術,標記并觀察神經(jīng)干細胞、膠質(zhì)細胞以及血管發(fā)生之間的相互關系,比較兩組小鼠RMS發(fā)育情況。目的:探討小鼠室管膜下區(qū)神經(jīng)干細胞孵育成熟的微環(huán)境及其結構以及神經(jīng)干細胞沿RMS切線遷移至嗅球(Olfactory Bulb,OB)并在嗅球分化整合的過程,尤其是Reelin對細胞遷移和細胞分化的影響。方法:選用50只WT小鼠和23只純合reeler小鼠胚胎16天至生后90天的各年齡點小鼠大腦共計73只,應用Evans blue腦室注射技術標記神經(jīng)干細胞的動態(tài)遷移,采用免疫熒光技術、墨汁灌注技術及電鏡技術,標記并觀察小鼠大腦的神經(jīng)干細胞、膠質(zhì)細胞以及血管發(fā)生之間的相互關系,比較兩組小鼠RMS發(fā)育情況。結果:①胚胎后期至出生早期,在SVZ分布著大量的膠質(zhì)細胞、神經(jīng)干細胞和血管網(wǎng),它們相互聯(lián)系構成SVZ神經(jīng)干細胞孵育的血管龕;②神經(jīng)干細胞在血管龕孵育成熟后,可以進入RMS,切線遷移至嗅球,到達嗅球后轉(zhuǎn)變?yōu)榉派錉钸w移,向四周分化為各類神經(jīng)元整合入嗅球形成嗅球的各層結構。神經(jīng)干細胞在RMS的遷移過程中,放射狀膠質(zhì)細胞協(xié)同血管為其提供引導支架;③Reeler小鼠的神經(jīng)干細胞增殖區(qū)及細胞分化與WT小鼠是相似的,reeler小鼠也能形成RMS,但形態(tài)有所改變,主要在嗅球處,神經(jīng)干細胞失去規(guī)律排列,呈散亂分布。Reeler小鼠血管發(fā)育紊亂主要表現(xiàn)在分支增多,走向雜亂。結論:室管下區(qū)的血管龕(niche)是神經(jīng)干細胞的主要來源,血管龕為神經(jīng)干細胞的增殖和成熟提供了穩(wěn)定的微環(huán)境;血管協(xié)同放射狀膠質(zhì)細胞為RMS中的神經(jīng)干細胞提供支架引導作用;作為調(diào)節(jié)細胞遷移的重要信號,Reelin可以通過其交互作用影響血管的發(fā)育,Reelin缺失將會導致血管分支增多,分布紊亂,此外,Reelin缺失導致細胞遷移異常,嗅球處神經(jīng)干細胞整合障礙。
【關鍵詞】：喙端遷移流 Reelin 嗅球 血管 小鼠
【學位授予單位】：河南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R338
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 縮略語表10-11
• 1 引言11-13
• 2 材料、儀器與方法13-22
• 2.1 實驗動物13
• 2.2 主要儀器13-14
• 2.3 主要試劑及其配方14-18
• 2.3.1 常規(guī)試劑14-16
• 2.3.2 免疫組織化學所用試劑16
• 2.3.3 PCR所用試劑16-17
• 2.3.4 透射電子顯微鏡所用試劑17-18
• 2.4 實驗方法18-21
• 2.4.1 PCR鑒定技術18-19
• 2.4.2 標本制作19
• 2.4.3 免疫熒光技術19-20
• 2.4.4 尼氏染色技術20
• 2.4.5 墨汁灌注法20
• 2.4.6 透射電鏡標本制作20-21
• 2.4.7 Evans blue標記技術21
• 2.5 統(tǒng)計學處理21-22
• 3 結果22-32
• 3.1 RMS與神經(jīng)血管龕22-24
• 3.2 RMS與神經(jīng)干細胞遷移24-25
• 3.3 神經(jīng)干細胞在嗅球的分化25-27
• 3.4 Reelin與RMS發(fā)育27-32
• 4 討論32-36
• 4.1 室管膜下區(qū)的血管龕是神經(jīng)干細胞主要來源32-33
• 4.2 血管協(xié)同放射狀膠質(zhì)細胞引導RMS中細胞遷移33-34
• 4.3 Reelin缺失導致血管發(fā)育紊亂34
• 4.4 Reelin缺失導致嗅球處神經(jīng)干細胞整合障礙34-36
• 5 結論36-37
• 參考文獻37-39
• 文獻綜述39-48
• 摘要39-40
• 1 細胞遷移方式40-41
• 1.1 膠質(zhì)性遷移40
• 1.2 神經(jīng)元性遷移40-41
• 1.3 血管性遷移41
• 2 血管性遷移的發(fā)生41-43
• 2.1 神經(jīng)血管龕41-42
• 2.2 血管性遷移方式42-43
• 3 血管性遷移的調(diào)節(jié)機制43-45
• 3.1 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子在細胞遷移中的作用43
• 3.2 血管趨化因子在細胞遷移中的作用43-44
• 3.3 血管內(nèi)皮生長因子在細胞遷移中的作用44-45
• 參考文獻45-48
• 致謝48-49
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文49-50

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本文編號：403304