發(fā)布時(shí)間：2017-05-28 20:00

  本文關(guān)鍵詞：Reelin調(diào)節(jié)小鼠喙端遷移流發(fā)育的形態(tài)學(xué)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：神經(jīng)干細(xì)胞指的是一類(lèi)特定的干細(xì)胞,它具有自我更新能力,通過(guò)非對(duì)稱(chēng)分裂方式產(chǎn)生其他細(xì)胞從而生成神經(jīng)組織。神經(jīng)干細(xì)胞的孵育成熟、遷移和分化與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育息息相關(guān),對(duì)于理解神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、損傷及其修復(fù)機(jī)制至關(guān)重要。神經(jīng)干細(xì)胞的增殖、孵育成熟是個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育的基礎(chǔ);神經(jīng)干細(xì)胞的定向遷移是胚胎神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的先決條件,個(gè)體發(fā)育以及組織損傷修復(fù)都依賴(lài)于干細(xì)胞的定向遷移;細(xì)胞遷移到特定的部位受到一系列的分子信號(hào)的調(diào)控而后分化為特定的細(xì)胞發(fā)揮其功能,神經(jīng)干細(xì)胞的分化為個(gè)體不同器官的形成、發(fā)育及各個(gè)功能的完善提供了必要條件。目前已確定的細(xì)胞遷移方式有兩種:放射狀遷移和切線(xiàn)遷移。Doetsch認(rèn)為喙端遷移流(Rostral Migratory Stream,RMS)是由室管膜下區(qū)(Subventricular Zone,SVZ)的遷移細(xì)胞從后至前貫穿于整個(gè)側(cè)腦室外側(cè)壁匯聚而成,RMS是SVZ神經(jīng)干細(xì)胞向嗅球部位遷移所經(jīng)過(guò)的高度受限通道。RMS作為細(xì)胞切線(xiàn)遷移的典型代表,是研究切線(xiàn)遷移的最佳模型。Reelin蛋白是細(xì)胞遷移起始與停止的調(diào)節(jié)信號(hào),載脂蛋白E2受體(Apolipoprotein E Receptor 2,ApoER2)和極低密度脂蛋白受體(Very Low Density Lipoprotein Receptor,VLDLR)參與Reelin信號(hào)通路,Reelin蛋白與二者相結(jié)合,誘導(dǎo)胞內(nèi)效應(yīng)器Dab1磷酸化,從而使遷移的細(xì)胞從其支架—放射狀膠質(zhì)細(xì)胞纖維上脫落,按照“inside-out”模式遷移定位,形成皮質(zhì)的六層結(jié)構(gòu)。作為調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移的重要信號(hào),Reelin對(duì)神經(jīng)細(xì)胞遷移、皮質(zhì)片層化形成和大腦皮質(zhì)發(fā)育起著非常重要的作用。Reelin蛋白合成或分泌障礙甚至異常都將導(dǎo)致一系列的精神系統(tǒng)疾病,比如精神分裂癥、顳葉癲癇癥及自閉癥等等,因此了解Reelin對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的影響有著一定的基礎(chǔ)意義,對(duì)精神系統(tǒng)疾病的治療有一定的臨床指導(dǎo)意義。長(zhǎng)期以來(lái),人們對(duì)Reelin信號(hào)通路在放射狀遷移中的作用進(jìn)行了大量研究,但是Reelin信號(hào)通路在RMS發(fā)育中承擔(dān)的角色尚不清楚。因此,我們采用野生型(Wild Type,WT)小鼠和reeler小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,應(yīng)用免疫組織熒光技術(shù)、墨汁灌注技術(shù)及電鏡技術(shù),標(biāo)記并觀察神經(jīng)干細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞以及血管發(fā)生之間的相互關(guān)系,比較兩組小鼠RMS發(fā)育情況。目的:探討小鼠室管膜下區(qū)神經(jīng)干細(xì)胞孵育成熟的微環(huán)境及其結(jié)構(gòu)以及神經(jīng)干細(xì)胞沿RMS切線(xiàn)遷移至嗅球(Olfactory Bulb,OB)并在嗅球分化整合的過(guò)程,尤其是Reelin對(duì)細(xì)胞遷移和細(xì)胞分化的影響。方法:選用50只WT小鼠和23只純合reeler小鼠胚胎16天至生后90天的各年齡點(diǎn)小鼠大腦共計(jì)73只,應(yīng)用Evans blue腦室注射技術(shù)標(biāo)記神經(jīng)干細(xì)胞的動(dòng)態(tài)遷移,采用免疫熒光技術(shù)、墨汁灌注技術(shù)及電鏡技術(shù),標(biāo)記并觀察小鼠大腦的神經(jīng)干細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞以及血管發(fā)生之間的相互關(guān)系,比較兩組小鼠RMS發(fā)育情況。結(jié)果:①胚胎后期至出生早期,在SVZ分布著大量的膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞和血管網(wǎng),它們相互聯(lián)系構(gòu)成SVZ神經(jīng)干細(xì)胞孵育的血管龕;②神經(jīng)干細(xì)胞在血管龕孵育成熟后,可以進(jìn)入RMS,切線(xiàn)遷移至嗅球,到達(dá)嗅球后轉(zhuǎn)變?yōu)榉派錉钸w移,向四周分化為各類(lèi)神經(jīng)元整合入嗅球形成嗅球的各層結(jié)構(gòu)。神經(jīng)干細(xì)胞在RMS的遷移過(guò)程中,放射狀膠質(zhì)細(xì)胞協(xié)同血管為其提供引導(dǎo)支架;③Reeler小鼠的神經(jīng)干細(xì)胞增殖區(qū)及細(xì)胞分化與WT小鼠是相似的,reeler小鼠也能形成RMS,但形態(tài)有所改變,主要在嗅球處,神經(jīng)干細(xì)胞失去規(guī)律排列,呈散亂分布。Reeler小鼠血管發(fā)育紊亂主要表現(xiàn)在分支增多,走向雜亂。結(jié)論:室管下區(qū)的血管龕(niche)是神經(jīng)干細(xì)胞的主要來(lái)源,血管龕為神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和成熟提供了穩(wěn)定的微環(huán)境;血管協(xié)同放射狀膠質(zhì)細(xì)胞為RMS中的神經(jīng)干細(xì)胞提供支架引導(dǎo)作用;作為調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移的重要信號(hào),Reelin可以通過(guò)其交互作用影響血管的發(fā)育,Reelin缺失將會(huì)導(dǎo)致血管分支增多,分布紊亂,此外,Reelin缺失導(dǎo)致細(xì)胞遷移異常,嗅球處神經(jīng)干細(xì)胞整合障礙。
【關(guān)鍵詞】：喙端遷移流 Reelin 嗅球 血管 小鼠
【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R338
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 縮略語(yǔ)表10-11
• 1 引言11-13
• 2 材料、儀器與方法13-22
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物13
• 2.2 主要儀器13-14
• 2.3 主要試劑及其配方14-18
• 2.3.1 常規(guī)試劑14-16
• 2.3.2 免疫組織化學(xué)所用試劑16
• 2.3.3 PCR所用試劑16-17
• 2.3.4 透射電子顯微鏡所用試劑17-18
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法18-21
• 2.4.1 PCR鑒定技術(shù)18-19
• 2.4.2 標(biāo)本制作19
• 2.4.3 免疫熒光技術(shù)19-20
• 2.4.4 尼氏染色技術(shù)20
• 2.4.5 墨汁灌注法20
• 2.4.6 透射電鏡標(biāo)本制作20-21
• 2.4.7 Evans blue標(biāo)記技術(shù)21
• 2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理21-22
• 3 結(jié)果22-32
• 3.1 RMS與神經(jīng)血管龕22-24
• 3.2 RMS與神經(jīng)干細(xì)胞遷移24-25
• 3.3 神經(jīng)干細(xì)胞在嗅球的分化25-27
• 3.4 Reelin與RMS發(fā)育27-32
• 4 討論32-36
• 4.1 室管膜下區(qū)的血管龕是神經(jīng)干細(xì)胞主要來(lái)源32-33
• 4.2 血管協(xié)同放射狀膠質(zhì)細(xì)胞引導(dǎo)RMS中細(xì)胞遷移33-34
• 4.3 Reelin缺失導(dǎo)致血管發(fā)育紊亂34
• 4.4 Reelin缺失導(dǎo)致嗅球處神經(jīng)干細(xì)胞整合障礙34-36
• 5 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-39
• 文獻(xiàn)綜述39-48
• 摘要39-40
• 1 細(xì)胞遷移方式40-41
• 1.1 膠質(zhì)性遷移40
• 1.2 神經(jīng)元性遷移40-41
• 1.3 血管性遷移41
• 2 血管性遷移的發(fā)生41-43
• 2.1 神經(jīng)血管龕41-42
• 2.2 血管性遷移方式42-43
• 3 血管性遷移的調(diào)節(jié)機(jī)制43-45
• 3.1 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子在細(xì)胞遷移中的作用43
• 3.2 血管趨化因子在細(xì)胞遷移中的作用43-44
• 3.3 血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在細(xì)胞遷移中的作用44-45
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 致謝48-49
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文49-50

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