目的建立間充質(zhì)干細胞（MSCs）衰老模型,探討C1q/TNF相關(guān)蛋白3（CTRP3）對衰老MSCs的作用并初步探討機制。方法用過氧化氫（H₂O₂）誘導小鼠MSCs衰老,CCK8實驗和β-半乳糖苷酶染色驗證模型的建立。外源性給予CTRP3處理MSCs 24 h,CCK8實驗檢測增殖活性,β-半乳糖苷酶染色檢測MSCs衰老,分化誘導實驗檢測MSCs分化能力,Western blotting法檢測MSCs凋亡。RT-PCR檢測MSCs中衰老相關(guān)基因P16、P21以及抗衰老基因SIRT1的mRNA表達變化。采用GraphPad Prism 6進行統(tǒng)計分析。組間比較采用方差分析或LSD兩兩比較。結(jié)果 H₂O₂可抑制MSCs的增殖活性,且呈濃度依賴性。與正常對照組相比,200μmol/L H₂O₂作用4 h,細胞立體感消失,細胞形態(tài)不規(guī)則;CCK8染色結(jié)果顯示細胞增殖活性顯著下降;β-半乳糖苷酶陽性細胞百分比顯著升高。繼續(xù)CTRP3處理24 h后,衰老MSCs增殖和分...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 MSCs的培養(yǎng)
    1.2 CTRP3蛋白的制備
    1.3 MSCs衰老模型的建立
    1.4 CCK8測細胞活性
    1.5 細胞β-半乳糖苷酶染色
    1.6 MSCs成脂成骨誘導分化實驗
    1.7 Western blotting分析細胞蛋白表達水平
    1.8 RNA提取和RT-PCR
    1.9 統(tǒng)計學處理
2 結(jié) 果
    2.1 H2O2呈濃度依賴性地抑制MSCs增殖活性
    2.2 成功建立衰老模型
    2.3 CTRP3抑制MSCs的衰老
    2.4 CTRP3增強衰老MSCs的分化潛能
    2.5 CTRP3抑制衰老MSCs凋亡
    2.6 CTRP3下調(diào)P16和P21表達, 上調(diào)SIRT1的 表達
3 討 論



本文編號：4009606