目的：人免疫缺陷病毒(HIV)是引起艾滋病的病原體，分為兩型，HIV-1和HIV-2。HIV-1在全球范圍傳播廣泛，是艾滋病流行的主要病原體。HIV-1外膜蛋白gp120(HIV-1 env gp120,簡稱gp120)是HIV-1的重要抗原成分，是檢測抗gp120抗體診斷HIV-1感染試劑盒的重要組成成份，也是制備抗gp120單克隆抗體必需的免疫原，應(yīng)用十分廣泛，意義十分重大。本文旨在通過基因工程的方法獲得高純度的gp120抗原。 方法：以HIV-1 HXB2 cDNA 為模板進(jìn)行PCR，擴(kuò)增出gp120抗原的基因片段，再將這段基因片段與T載體pMD-18T連接，構(gòu)建重組克隆質(zhì)粒pMD-18T-120。經(jīng)PCR、雙酶切和DNA序列分析鑒定后，用NdeI和Xho I對基因重組正確的克隆進(jìn)行酶切，將所得目的基因插入到質(zhì)粒pET-22b相應(yīng)的多克隆位點，構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-22b-gp120，進(jìn)行PCR、酶切鑒定和DNA序列分析。用鑒定基因重組正確的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，IPTG小量誘導(dǎo),誘導(dǎo)產(chǎn)物用SDS-PAGE電泳進(jìn)行分析。選擇可產(chǎn)生目的蛋白的克隆，轉(zhuǎn)接至2L的L...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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研究論文 HIV-1gp120基因片段的克隆、表達(dá)、純化、鑒定和初步應(yīng)用
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
    參考文獻(xiàn)
    附圖
綜述 HIV檢測試劑研究進(jìn)展
致謝
個人簡歷



本文編號：3990413