Bt25是我國(guó)自行分離的對(duì)小菜蛾具有高毒力的蘇云金芽孢桿菌，經(jīng)PCR-RFLP系統(tǒng)鑒定它含有cry1Aa基因。以全長(zhǎng)基因PCR產(chǎn)物的粘端定向克隆的方法，設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物，以Bt25質(zhì)粒DNA為模板擴(kuò)增cry1Aa全長(zhǎng)基因。序列測(cè)定結(jié)果表明該基因編碼區(qū)為3552bps，編碼1183個(gè)氨基酸，分子量為133.7kDa，等電點(diǎn)為pI4.755。該基因序列已在GenBank注冊(cè)，Accession number為AY197341，并被國(guó)際Bt殺蟲(chóng)晶體蛋白基因命名委員會(huì)正式命名為cry1Aa14。在氨基酸序列918～1180間，和以知的13種cry1Aa的11種(不包括cry1Aa9和cry1Aa13)存在22或23個(gè)氨基酸的差異(其中1094～1097的4個(gè)氨基酸無(wú)對(duì)應(yīng)序列)，而這段區(qū)域和cry1Ab氨基酸序列的對(duì)應(yīng)區(qū)域無(wú)差異。cry1Aa14全長(zhǎng)基因插入Bt表達(dá)載體，獲得了重組表達(dá)質(zhì)粒pBYB1，轉(zhuǎn)化大腸桿菌SCS110和Bt無(wú)晶體突變株HD73cry^-，經(jīng)過(guò)抗性篩選、DNA酶切分析和PCR檢測(cè)，證實(shí)轉(zhuǎn)化成功。SDS-PAGE分析表明該基因在受體菌HD73cry

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
文獻(xiàn)綜述
    1 蘇云金芽孢桿菌
        1.1 蘇云金芽孢桿菌簡(jiǎn)介
        1.2 蘇云金芽孢桿菌毒素
        1.3 蘇云金芽孢桿菌殺蟲(chóng)作用機(jī)制
        1.4 蘇云金芽孢桿菌的應(yīng)用
    2 載體在蘇云金芽孢桿菌工程菌構(gòu)建中的重要位置
引言
材料和方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 cry1Aa14基因的克隆和表達(dá)
        2.2 Bt復(fù)制區(qū)的克隆
結(jié)果與分析
    1 cry1Aa14基因的克隆和表達(dá)
        1.1 Bt25菌株形態(tài)特征
        1.2 基因型的鑒定
        1.3 cry1Aa全長(zhǎng)基因的克隆
        1.4 cry1Aa基因的序列析
        1.5 cry1Aa14基因在Bt無(wú)晶體突變株中表達(dá)
        1.6 cry1Aa14基因表達(dá)產(chǎn)物對(duì)小菜蛾幼蟲(chóng)的生物活性測(cè)定
    2 Bt復(fù)制區(qū)的克隆
        2.1 pHT315的改造
        2.2 Bt質(zhì)粒DNA文庫(kù)構(gòu)建
        2.3 復(fù)制區(qū)的克隆
        2.4 復(fù)制區(qū)的鑒定
        2.5 復(fù)制區(qū)序列分析
        2.6 復(fù)制區(qū)穩(wěn)定性檢測(cè)
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文摘要
致謝



本文編號(hào)：3979521