Bt25是我國自行分離的對小菜蛾具有高毒力的蘇云金芽孢桿菌，經(jīng)PCR-RFLP系統(tǒng)鑒定它含有cry1Aa基因。以全長基因PCR產(chǎn)物的粘端定向克隆的方法，設計一對特異引物，以Bt25質(zhì)粒DNA為模板擴增cry1Aa全長基因。序列測定結(jié)果表明該基因編碼區(qū)為3552bps，編碼1183個氨基酸，分子量為133.7kDa，等電點為pI4.755。該基因序列已在GenBank注冊，Accession number為AY197341，并被國際Bt殺蟲晶體蛋白基因命名委員會正式命名為cry1Aa14。在氨基酸序列918～1180間，和以知的13種cry1Aa的11種(不包括cry1Aa9和cry1Aa13)存在22或23個氨基酸的差異(其中1094～1097的4個氨基酸無對應序列)，而這段區(qū)域和cry1Ab氨基酸序列的對應區(qū)域無差異。cry1Aa14全長基因插入Bt表達載體，獲得了重組表達質(zhì)粒pBYB1，轉(zhuǎn)化大腸桿菌SCS110和Bt無晶體突變株HD73cry^-，經(jīng)過抗性篩選、DNA酶切分析和PCR檢測，證實轉(zhuǎn)化成功。SDS-PAGE分析表明該基因在受體菌HD73cry

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
文獻綜述
    1 蘇云金芽孢桿菌
        1.1 蘇云金芽孢桿菌簡介
        1.2 蘇云金芽孢桿菌毒素
        1.3 蘇云金芽孢桿菌殺蟲作用機制
        1.4 蘇云金芽孢桿菌的應用
    2 載體在蘇云金芽孢桿菌工程菌構(gòu)建中的重要位置
引言
材料和方法
    1 實驗材料
    2 實驗方法
        2.1 cry1Aa14基因的克隆和表達
        2.2 Bt復制區(qū)的克隆
結(jié)果與分析
    1 cry1Aa14基因的克隆和表達
        1.1 Bt25菌株形態(tài)特征
        1.2 基因型的鑒定
        1.3 cry1Aa全長基因的克隆
        1.4 cry1Aa基因的序列析
        1.5 cry1Aa14基因在Bt無晶體突變株中表達
        1.6 cry1Aa14基因表達產(chǎn)物對小菜蛾幼蟲的生物活性測定
    2 Bt復制區(qū)的克隆
        2.1 pHT315的改造
        2.2 Bt質(zhì)粒DNA文庫構(gòu)建
        2.3 復制區(qū)的克隆
        2.4 復制區(qū)的鑒定
        2.5 復制區(qū)序列分析
        2.6 復制區(qū)穩(wěn)定性檢測
討論
結(jié)論
參考文獻
英文摘要
致謝



本文編號：3979521