Mac-1(CD11b/CD18)是位于白細(xì)胞表面參與機(jī)體防御功能及免疫反應(yīng)的重要粘附分子。它由α(CD11b)和β(CD18)兩個(gè)亞基以非共價(jià)鍵的方式締合成異二聚體；編碼CD11b和CD18的基因在人分別位于第16號和第21號染色體上。Mac-1具有兩種主要功能：一是與活化的內(nèi)皮細(xì)胞表面上的ICAM-1高親和力的粘附，介導(dǎo)白細(xì)胞的游走與滲出。二是介導(dǎo)白細(xì)胞對iC₃b調(diào)理的微生物或免疫復(fù)合物的細(xì)胞毒功能。 迄今為止，Mac-1粘附功能的研究已經(jīng)相當(dāng)深入，但對于Mac-1的分布、貯存、轉(zhuǎn)位和變構(gòu)的過程，雖然文獻(xiàn)報(bào)告很多，但由于方法學(xué)的限制，尚未見有在一個(gè)活細(xì)胞內(nèi)對其全過程進(jìn)行動(dòng)態(tài)實(shí)時(shí)的定位定量的研究。以往文獻(xiàn)中研究Mac-1的分布、貯存、轉(zhuǎn)位的方法，主要采用的是抗體標(biāo)記Mac-1，用流式細(xì)胞術(shù)測定或免疫組化技術(shù)顯微鏡下直接觀察Mac-1的細(xì)胞內(nèi)分布，但其缺點(diǎn)是不可能在單細(xì)胞、活細(xì)胞連續(xù)地觀察，如果要研究在細(xì)胞內(nèi)的走向則還需要增大細(xì)胞表面通透性，這就難免干擾了細(xì)胞的生理狀態(tài)。作為一種標(biāo)記物，GFP(綠色熒光蛋白)具有發(fā)光不需要底物、穩(wěn)定、無毒性、分子量小、形成...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖3pcDnb一CFP融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒的酶切鑒定PECFp一NIHindlll/KPnl雙酶切ABCDEF

碩士論文Mac一1一FP肚合蛋白在CHO細(xì)施結(jié)果與討論FP融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒的篩選和鑒定白表達(dá)質(zhì)粒pCDIlb一BFp分別用Hindlll單酶切與HindllP一Nl表達(dá)載體用Hindlll和KPnl雙酶切，1%的瓊脂糖凝膠大小分別為:pCDllb一BFP一Hindlll單酶切8.....

圖5pcDllb一cFP穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞4周時(shí)的熒光顯微鏡下成像

士論文Mac小FP觸合蛋會(huì)在CRO如鵝穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞4周時(shí)的熒光顯微鏡下成像白表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHo細(xì)胞后，高濃度G418(1000林歲ml)篩野生型CHO細(xì)胞全部死亡，轉(zhuǎn)染pCD1lb一CFP的CHO細(xì)的轉(zhuǎn)染細(xì)胞繼續(xù)用高濃度G418篩選3周，熒光顯微鏡激發(fā)能夠發(fā)出青色熒光的轉(zhuǎn)染....

圖5pcDllb一cFP穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞4周時(shí)的熒光顯微鏡下成像

大學(xué)碩士論文Mac小FP觸合蛋會(huì)在CRO如鵝中的b一CFP穩(wěn)定轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞4周時(shí)的熒光顯微鏡下成像融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHo細(xì)胞后，高濃度G418(1000林歲ml)篩選細(xì)對照組野生型CHO細(xì)胞全部死亡，轉(zhuǎn)染pCD1lb一CFP的CHO細(xì)胞未死的轉(zhuǎn)染細(xì)胞繼續(xù)用高濃度G418篩選....

圖7cHo一cDnb一CFP細(xì)胞再轉(zhuǎn)染pYFI，一CD18后熒光顯微鏡下成像

Mac小FP觸合蛋合在CH細(xì)胞再轉(zhuǎn)染pYFp一CD18后熒光顯微鏡下融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到已獲得的CHo一CD0nm和492nm的熒光顯微鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)m和492nm激發(fā)光下發(fā)出青色和黃色熒光(定表達(dá)CDIlb一CFP和YFP一CD18融合蛋白的C細(xì)胞)。

本文編號：3973771