盡管針對脊髓灰質(zhì)炎病毒已經(jīng)有長達(dá)數(shù)百年的研究并成功研制出了預(yù)防性疫苗,但是對于該病毒如何啟動(dòng)機(jī)體天然免疫反應(yīng),進(jìn)而激活獲得性免疫反應(yīng)這一過程的具體分子機(jī)理仍有諸多空白。本研究通過體外分析脊髓灰質(zhì)炎病毒Sabin減毒株Ⅰ型的結(jié)構(gòu)蛋白對人呼吸道上皮細(xì)胞內(nèi)天然免疫反應(yīng)信號(hào)分子的影響,了解脊髓灰質(zhì)炎病毒在上皮細(xì)胞中啟動(dòng)免疫信號(hào)的具體分子機(jī)制。采用PCR方法擴(kuò)增脊髓灰質(zhì)炎病毒四種結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2、VP3和VP4,經(jīng)酶切純化后與pcDNA3.1+真核表達(dá)載體連接,分別構(gòu)建含目的基因的四種重組質(zhì)粒。將重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染至人呼吸道上皮細(xì)胞16HBE中,48h后收集培養(yǎng)上清、細(xì)胞。提取細(xì)胞的總RNA,利用Q-PCR法分別檢測四種結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)所誘導(dǎo)的天然免疫信號(hào)分子的mRNA表達(dá)量。同時(shí),上清、細(xì)胞裂解物分別與人T細(xì)胞共培養(yǎng),檢測其對T細(xì)胞增殖的影響。體外在16HBE細(xì)胞中分別表達(dá)SabinⅠ病毒VP1～VP4四種結(jié)構(gòu)蛋白均可刺激如LTα3、NIK等NF-κB天然免疫信號(hào)通路相關(guān)分子的表達(dá),并且表達(dá)這四種蛋白的細(xì)胞裂解物與T細(xì)胞共培養(yǎng)后均表現(xiàn)出刺激T細(xì)胞非特異性增殖的效應(yīng)。但是,僅有VP1、VP2表達(dá)...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
材料與方法
    1細(xì)胞及毒株
    2主要試劑
    3細(xì)胞培養(yǎng)
    4真核表達(dá)載體構(gòu)建
    5細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    6結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)檢測
    7結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)后的樣本收集
    8實(shí)時(shí)定量PCR
    9 ELISPOT分析
    10統(tǒng)計(jì)分析
結(jié)果
    1含有PV結(jié)構(gòu)蛋白VP1、VP2、VP3和VP4的4個(gè)真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定
    2PV四種結(jié)構(gòu)蛋白在16HBE細(xì)胞中表達(dá)對NF-κB信號(hào)通路的相關(guān)免疫反應(yīng)分子表達(dá)的影響
    3PV四種結(jié)構(gòu)蛋白在16HBE細(xì)胞中表達(dá)對人類初始T細(xì)胞的非特異性刺激效應(yīng)
討論



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