慢性乙型肝炎是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一，它是由乙型肝炎病毒的感染引起的�；颊唧w內(nèi)針對病毒的特異性細(xì)胞免疫功能低下，無法及時、徹底清除病毒，由機(jī)體產(chǎn)生的非特異性免疫反應(yīng)造成了肝組織的慢性病理損傷。所以能夠引起強(qiáng)烈細(xì)胞免疫應(yīng)答的“prime-boost”免疫策略成為乙型肝炎免疫治療的有力策略。我們構(gòu)建了表達(dá)病毒表面抗原的DNA疫苗和重組痘病毒(MVA)載體疫苗，采取“prime-boost”免疫方案免疫小鼠。因?yàn)镈NA疫苗的免疫原性較弱，所以利用細(xì)胞因子作為佐劑來增強(qiáng)疫苗的免疫原性。同時在乙肝轉(zhuǎn)基因小鼠上考察此種免疫方案的治療作用。 本論文共選擇IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、GM-CSF和IFN-γ六種鼠源細(xì)胞因子佐劑。論文第一部分實(shí)驗(yàn)以普通小鼠為動物模型，用細(xì)胞因子與HBV DNA疫苗同時免疫小鼠，然后以重組痘病毒疫苗加強(qiáng)免疫，檢測不同細(xì)胞因子或其組合對HBV DNA疫苗的免疫加強(qiáng)作用。結(jié)果表明：1 在增強(qiáng)疫苗體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)方面，IL-2質(zhì)粒要強(qiáng)于IL-2蛋白，所以要選擇質(zhì)粒形式的細(xì)胞因子作為佐劑。2 在增強(qiáng)疫苗細(xì)胞免疫反應(yīng)方面，IL-12、IFN-γ和...

【文章頁數(shù)】：117 頁

【文章目錄】：
第一章 前言
    一 乙型肝炎病毒概述
        1 乙型肝炎的流行病學(xué)和臨床癥狀
        2 乙型肝炎病毒的分子生物學(xué)
        3 乙型肝炎病毒感染和致病機(jī)理
    二 治療性HBV疫苗的研究現(xiàn)狀
        1 治療性HBV DNA疫苗的歷史
        2 重組MVA病毒疫苗的研究進(jìn)展
        3 “prime-boost”免疫策略的優(yōu)勢
    三 細(xì)胞因子佐劑的研究進(jìn)展
        1 細(xì)胞因子概述
        2 細(xì)胞因子在疫苗中的應(yīng)用
        3 細(xì)胞因子的佐劑效應(yīng)
        4 小結(jié)
    四 本論文的設(shè)計思想
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    一 材料、儀器和溶液
        1 材料
        2 儀器
        3 溶液
    二 治療性HBV DNA疫苗的構(gòu)建及研究
        1 治療性HBV DNA疫苗的構(gòu)建
        2 治療性HBV DNA疫苗在真核細(xì)胞中的表達(dá)分析
        3 質(zhì)粒的大規(guī)模提取
    三 重組痘病毒疫苗的構(gòu)建與研究
        1 重組痘病毒疫苗的構(gòu)建
        2 重組痘病毒疫苗的鑒定
        3 重組痘病毒疫苗的擴(kuò)增和純化
        4 重組痘病毒滴度測定
    四 DNA-prime／MVA-boost混合免疫與單獨(dú)免疫的比較
        1 動物試驗(yàn)設(shè)計
        2 抗體水平檢測
        3 CTL實(shí)驗(yàn)
        4 ELISPOT實(shí)驗(yàn)
    五 細(xì)胞因子對治療性HBV疫苗免疫應(yīng)答的影響
        1 比較IL-2蛋白和質(zhì)粒對治療性HBV疫苗免疫應(yīng)答的影響
        2 比較不同細(xì)胞因子對治療性HBV疫苗的增強(qiáng)作用
        3 GM-CSF和IL-2聯(lián)合應(yīng)用對治療性HBV疫苗免疫應(yīng)答的影響
    六 治療性HBV疫苗對轉(zhuǎn)基因小鼠的治療作用
        1 動物實(shí)驗(yàn)設(shè)計
        2 表面抗原水平檢測
        3 表面抗體水平的檢測
        4 HBV病毒定量
        5 CTL實(shí)驗(yàn)
        6 轉(zhuǎn)氨酶檢測
        7 病理切片
第三章 結(jié)果與討論
    一 治療性HBV DNA疫苗的構(gòu)建
        1 獲得表面抗原基因
        2 表面抗原基因連接到pGEM-T easy載體上
        3 表面抗原基因連接到真核表達(dá)載體VR1012上
        4 治療性HBV DNA疫苗pVR1012／HBs表達(dá)蛋白的鑒定
        5 質(zhì)粒的大規(guī)模提取
        6 小結(jié)
    二 重組痘病毒疫苗的構(gòu)建、表達(dá)及鑒定
        1 MVA病毒重組穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建
        2 重組痘病毒的篩選
        3 重組病毒的PCR鑒定
        4 重組病毒表面抗原的表達(dá)
        5 病毒滴度測定
        6 小結(jié)
    三 DNA-prime／MVA-boost混合免疫與單獨(dú)免疫的比較
        1 MVA boost對DNA疫苗體液免疫的影響
        2 MVA boost對DNA疫苗CTL實(shí)驗(yàn)的影響
        3 MVA boost對DNA疫苗ELISPOT實(shí)驗(yàn)的影響
        4 小結(jié)
    四 細(xì)胞因子對治療性HBV疫苗免疫應(yīng)答的影響
        1 IL-2蛋白和質(zhì)粒對治療性HBV疫苗免疫應(yīng)答的影響
        2 不同細(xì)胞因子對治療性HBV疫苗免疫應(yīng)答的影響
        3 聯(lián)合GM-CSF和IL-2對治療性HBV疫苗免疫應(yīng)答的影響
        4 小結(jié)
    五 治療性HBV疫苗對轉(zhuǎn)基因小鼠的治療作用
        1 轉(zhuǎn)基因小鼠血清中表面抗原濃度的檢測
        2 轉(zhuǎn)基因小鼠血清中表面抗體濃度的檢測
        3 轉(zhuǎn)基因小鼠血清中HBV DNA病毒滴度的檢測
        4 轉(zhuǎn)基因小鼠肝功能指標(biāo)—谷丙轉(zhuǎn)氨酶檢測
        5 轉(zhuǎn)基因小鼠的肝臟病理切片
        6 CTL實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果
        7 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
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