慢性乙型肝炎是嚴重威脅人類健康的疾病之一，它是由乙型肝炎病毒的感染引起的�；颊唧w內(nèi)針對病毒的特異性細胞免疫功能低下，無法及時、徹底清除病毒，由機體產(chǎn)生的非特異性免疫反應造成了肝組織的慢性病理損傷。所以能夠引起強烈細胞免疫應答的“prime-boost”免疫策略成為乙型肝炎免疫治療的有力策略。我們構建了表達病毒表面抗原的DNA疫苗和重組痘病毒(MVA)載體疫苗，采取“prime-boost”免疫方案免疫小鼠。因為DNA疫苗的免疫原性較弱，所以利用細胞因子作為佐劑來增強疫苗的免疫原性。同時在乙肝轉基因小鼠上考察此種免疫方案的治療作用。 本論文共選擇IL-2、IL-12、IL-15、IL-18、GM-CSF和IFN-γ六種鼠源細胞因子佐劑。論文第一部分實驗以普通小鼠為動物模型，用細胞因子與HBV DNA疫苗同時免疫小鼠，然后以重組痘病毒疫苗加強免疫，檢測不同細胞因子或其組合對HBV DNA疫苗的免疫加強作用。結果表明：1 在增強疫苗體液免疫和細胞免疫反應方面，IL-2質粒要強于IL-2蛋白，所以要選擇質粒形式的細胞因子作為佐劑。2 在增強疫苗細胞免疫反應方面，IL-12、IFN-γ和...

【文章頁數(shù)】：117 頁

【文章目錄】：
第一章 前言
    一 乙型肝炎病毒概述
        1 乙型肝炎的流行病學和臨床癥狀
        2 乙型肝炎病毒的分子生物學
        3 乙型肝炎病毒感染和致病機理
    二 治療性HBV疫苗的研究現(xiàn)狀
        1 治療性HBV DNA疫苗的歷史
        2 重組MVA病毒疫苗的研究進展
        3 “prime-boost”免疫策略的優(yōu)勢
    三 細胞因子佐劑的研究進展
        1 細胞因子概述
        2 細胞因子在疫苗中的應用
        3 細胞因子的佐劑效應
        4 小結
    四 本論文的設計思想
第二章 實驗材料和方法
    一 材料、儀器和溶液
        1 材料
        2 儀器
        3 溶液
    二 治療性HBV DNA疫苗的構建及研究
        1 治療性HBV DNA疫苗的構建
        2 治療性HBV DNA疫苗在真核細胞中的表達分析
        3 質粒的大規(guī)模提取
    三 重組痘病毒疫苗的構建與研究
        1 重組痘病毒疫苗的構建
        2 重組痘病毒疫苗的鑒定
        3 重組痘病毒疫苗的擴增和純化
        4 重組痘病毒滴度測定
    四 DNA-prime／MVA-boost混合免疫與單獨免疫的比較
        1 動物試驗設計
        2 抗體水平檢測
        3 CTL實驗
        4 ELISPOT實驗
    五 細胞因子對治療性HBV疫苗免疫應答的影響
        1 比較IL-2蛋白和質粒對治療性HBV疫苗免疫應答的影響
        2 比較不同細胞因子對治療性HBV疫苗的增強作用
        3 GM-CSF和IL-2聯(lián)合應用對治療性HBV疫苗免疫應答的影響
    六 治療性HBV疫苗對轉基因小鼠的治療作用
        1 動物實驗設計
        2 表面抗原水平檢測
        3 表面抗體水平的檢測
        4 HBV病毒定量
        5 CTL實驗
        6 轉氨酶檢測
        7 病理切片
第三章 結果與討論
    一 治療性HBV DNA疫苗的構建
        1 獲得表面抗原基因
        2 表面抗原基因連接到pGEM-T easy載體上
        3 表面抗原基因連接到真核表達載體VR1012上
        4 治療性HBV DNA疫苗pVR1012／HBs表達蛋白的鑒定
        5 質粒的大規(guī)模提取
        6 小結
    二 重組痘病毒疫苗的構建、表達及鑒定
        1 MVA病毒重組穿梭質粒的構建
        2 重組痘病毒的篩選
        3 重組病毒的PCR鑒定
        4 重組病毒表面抗原的表達
        5 病毒滴度測定
        6 小結
    三 DNA-prime／MVA-boost混合免疫與單獨免疫的比較
        1 MVA boost對DNA疫苗體液免疫的影響
        2 MVA boost對DNA疫苗CTL實驗的影響
        3 MVA boost對DNA疫苗ELISPOT實驗的影響
        4 小結
    四 細胞因子對治療性HBV疫苗免疫應答的影響
        1 IL-2蛋白和質粒對治療性HBV疫苗免疫應答的影響
        2 不同細胞因子對治療性HBV疫苗免疫應答的影響
        3 聯(lián)合GM-CSF和IL-2對治療性HBV疫苗免疫應答的影響
        4 小結
    五 治療性HBV疫苗對轉基因小鼠的治療作用
        1 轉基因小鼠血清中表面抗原濃度的檢測
        2 轉基因小鼠血清中表面抗體濃度的檢測
        3 轉基因小鼠血清中HBV DNA病毒滴度的檢測
        4 轉基因小鼠肝功能指標—谷丙轉氨酶檢測
        5 轉基因小鼠的肝臟病理切片
        6 CTL實驗檢測結果
        7 小結
參考文獻
致謝
中文摘要
英文摘要
作者簡歷



本文編號：3939721