有關(guān)人的胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞的生理功能調(diào)節(jié)、受體分布、基因表達(dá)調(diào)控、癌變機(jī)制等方面的研究，仍是較為薄弱的領(lǐng)域，其中最重要的原因是分離培養(yǎng)以胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞為主的細(xì)胞群十分困難，特別是體外長期培養(yǎng)的問題至今沒有解決。基于本領(lǐng)域研究工作的迫切需要，我們進(jìn)行了這方面的工作。 首先，采用膠原酶消化的方法，分離人胚(中期引產(chǎn)的胎兒，20-30周)胰腺上皮細(xì)胞為細(xì)胞團(tuán)，將10％FBS完全培基加入到這些細(xì)胞團(tuán)中，接種至50ml塑料培養(yǎng)瓶，24小時后換2％FBS完全培基進(jìn)行原代培養(yǎng)。經(jīng)過近20個胎兒的胰腺標(biāo)本的分離培養(yǎng)，摸索出了適合于胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法和條件。若原代培養(yǎng)的細(xì)胞不傳代，其生活狀態(tài)可維持長達(dá)2月之久；也可以傳代，傳第3代的細(xì)胞仍以上皮細(xì)胞為主，細(xì)胞生長良好。 對原代培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行了初步的鑒定，結(jié)果為培養(yǎng)77、96小時的原代細(xì)胞，淀粉酶檢測陰性，Cytokeratin免疫細(xì)胞化學(xué)染色陽性，說明原代培養(yǎng)的細(xì)胞為導(dǎo)管上皮細(xì)胞而非腺泡細(xì)胞，為進(jìn)行體外轉(zhuǎn)化奠定了基礎(chǔ)。 在成功地建立胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞原代和傳代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，利用SV40 T基因摻入細(xì)胞基因組DNA后可以造成...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖3.大量提取質(zhì)粒psv一TDNA的鑒定

五、附圖令b令了矛了6.SKb一2.3kb圖3.大量提取質(zhì)粒psv一TDNA的鑒定結(jié)果顯示提取的質(zhì)粒DNA，與DNAn、arker比較，片段大小符合6.OKb;未經(jīng)酶切，經(jīng)BmaHl酶切、EC。咫酶切，其片段大小均與饋贈質(zhì)粒DNA的片段大小相吻合.(Std:饋贈質(zhì)粒DNA;PrP....

圖6.26周胎兒胰腺組織學(xué)(HE)

圖6.26周胎兒胰腺組織學(xué)(HE)a:小葉及導(dǎo)管40‘b:腺泡組織2

圖7.胰腺上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)培養(yǎng)36小時100培養(yǎng)70小時l()(j

圖7.胰腺上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)培養(yǎng)36小時100培養(yǎng)70小時l()(

圖8.胰腺上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)(l正)

圖8.胰腺上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)(l正)細(xì)胞團(tuán)周圍生長的上皮細(xì)

本文編號：3936136