探討不同濃度Cu²⁺脅迫對(duì)福壽螺肝胰腺組織金屬硫蛋白(metallothionein, MT)基因表達(dá)的影響,取15只福壽螺,在100μg/L Cu²⁺離子脅迫后的0、 1、 7、 14、 21 d,各取3只福壽螺,分離肝臟,提取RNA,反轉(zhuǎn)錄為c DNA,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)福壽螺金屬硫蛋白基因(Pc MT) mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。以cDNA為模板, PCR擴(kuò)增Pc MT基因完整編碼序列,連接至pET28a質(zhì)粒,轉(zhuǎn)入大腸埃希菌BL21 (DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,挑取陽(yáng)性克隆進(jìn)行鑒定與測(cè)序。用異丙基-β-D-硫代半乳糖苷誘導(dǎo)重組蛋白表達(dá),十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析表達(dá)產(chǎn)物。結(jié)果顯示, Cu²⁺脅迫0～14 d,福壽螺肝臟中Pc MT基因mRNA的表達(dá)量持續(xù)上升,峰值為2.1±0.2, 21 d時(shí)下降為1.1±0.1。PCR擴(kuò)增Pc MT基因,獲得長(zhǎng)度約300 bp的片段,構(gòu)建的pET28a-Pc MT質(zhì)粒經(jīng)PCR、雙酶切和測(cè)序鑒定,均與預(yù)期大小一致。SDS-PAGE結(jié)果顯示, Pc MT...

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 福壽螺來(lái)源
    1.2 主要試劑和儀器
    1.3 Cu2+脅迫對(duì)肝臟中Pc MT mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響
    1.4 Pc MT基因的原核表達(dá)
    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.6 倫理批準(zhǔn)和知情同意
2 結(jié)果
    2.1 Cu2+脅迫對(duì)肝臟中Pc MT mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響
    2.2 Pc MT基因PCR擴(kuò)增結(jié)果
    2.3 pET28a-Pc MT重組質(zhì)粒的鑒定
3 討論



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