目的 構(gòu)建重組人骨橋蛋白(recombinant human osteopontin，rhOPN)表達(dá)載體，誘導(dǎo)表達(dá)并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分離純化。制備多克隆抗體并分離純化，建立雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Sandwich enzyme linked immunoabsorbent assy，Sandwich ELISA)的方法。方法 收獲培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)，提取總RNA，進(jìn)行RT-PCR獲得人骨橋蛋白的cDNA，經(jīng)BamHI／SalI雙酶切，得到插入片段。同樣用雙酶切處理載體DNA，連接插入片段和載體，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌中。挑選陽(yáng)性克隆經(jīng)酶切鑒定和測(cè)序后，進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。用Glutathione Sepharose 4B親和層析柱純化融合蛋白，并用PreScission Protease進(jìn)行裂解。用裂解后的rhOPN作為抗原免疫家兔，制備多克隆抗體，結(jié)合離子交換層析方法和飽和硫酸銨沉淀法純化IgG，用過(guò)碘酸鈉改良法進(jìn)行偶聯(lián)IgG與辣根過(guò)氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)，并建...

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 (人骨橋蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的分離純化)
    摘要(中文)
    摘要(英文)
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 (多抗的制備、純化及其初步應(yīng)用)
    摘要(中文)
    摘要(英文)
    引言
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
本課題的進(jìn)一步設(shè)想
致謝
附錄
    個(gè)人簡(jiǎn)歷
    碩士研究生在讀期間發(fā)表的論文
綜述(人骨橋蛋白與腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移之間關(guān)系的研究進(jìn)展)
    一、 骨橋蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
    二、 人骨橋蛋白的生物學(xué)特點(diǎn)及意義
    三、 OPN的受體
    四、 與OPN有關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑
    五、 OPN與腫瘤轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3874290